Okruhy ke státní závěrečné zkoušce z předmětu Pokročilé separační metody Obecné principy imunochemie: Základní buňky imunitního systému, rozdělení složek imunitního systému (specifická a nespecifická imunita) Obecné principy chromatografie: Definice, význam a rozdělení separačních metod (metody využívající fázových rovnovah, separace v silových polích), podstata a princip chromatografie, historický vývoj. Termodynamický aspekt separace - popis distribuce složek mezi mobilní a stacionární fází (distribuční konstanta, retenční faktor, retenční časy a objemy, redukované veličiny, retenční indexy). Kinetický aspekt separace - účinnost separace a vliv pracovních podmínek na účinnost, představa teoretického patra, dynamická van Deemterova teorie. Hodnocení kvality separace - rozlišení, příspěvky, které se na něm podílejí. Metody kvalitativní a kvantitativní chromatografické analýzy - vlastnosti detekce (šum a drift signálu, citlivost, linearita, meze detekce a stanovení), zpracování signálu, postupy při kvantifikaci metodou vnitřní normalizace, vnitřního a vnějšího standardu, přídavku standardu a kalibrační křivky. Aglutinační a precipitační metody - přímá a nepřímá aglutinace, precipitační metody v roztoku a v gelu Imunoanalytické metody ze značenými indikátory- přehled, rozdělení, princip, uspořádání, jednotlivé složky, využití Plynová chromatografie: Princip plynové chromatografie, základní prvky plynového chromatografu, způsoby zavádění vzorků. Detektory v plynové chromatografii (tepelně vodivostní, ionizační detektory, spojení s hmotnostní spektrometrií). Typy kolon používané v plynové chromatografii, nosiče stacionární fáze, zakotvené a chemicky vázané stacionární fáze. Izotermické separace a práce s programovanou teplotou. Hlavní oblasti využití plynové chromatografie. Kapalinová chromatografie: Charakteristika vysokoúčinné kapalinové chromatografie, instrumentace, izokratická a gradientová eluce v HPLC. Kolony pro kapalinovou chromatografii - klasifikace kolon, rozměry, plnění. Stacionární fáze v HPLC - typy náplní (porézní, povrchově-porézní, monolitické), velikosti částic a jejich vliv na separaci. Základní rozdělení technik HPLC na základě interakcí ve stacionární a mobilní fázi, principy separace v systému s normálními a obrácenými fázemi, chromatografie hydrofilních interakcí, chromatografie iontové výměny, iontových párů a chromatografie sterické výluky. Hlavní oblasti využití kapalinové chromatografie. Struktura a vlastnosti antigenů a protilátek (příprava polyklonálních a monoklonálních protilátek) Metody purifikace antigenů a protilátek pomocí chromatografických metod Elektromigrační separační techniky: Princip a rozdělení elektromigračních separačních metod, instrumentální uspořádání. Základní veličiny (pohyblivost efektivní, zdánlivá), vyhodnocování elektroforegramů. Kapilární izotachoforéza a další elektroforetické módy (micelární elektrokinetická chromatografie, izoelektrická fokusace, gelová elektroforéza, elektrochromatografie). Hlavní oblasti aplikace elektromigračních separačních technik. Průkaz paraproteinů metodou imunoelektroforézy a imunofixace Identifikace antigenů a protilátek pomocí elektromigračních metod s imunochemickou detekcí - 2D elektroforéza, blotovací techniky
|