|
Vyučující
|
-
Korecká Lucie, doc. RNDr. Ph.D.
-
Slováková Marcela, doc. Mgr. Ph.D.
|
|
Obsah předmětu
|
Výuka probíhá blokově. Témata seminářů 1. Enzymová imunoanalýza - kompetitivní a nekompetitivní metody, metody RIA a EIA, automatické imunochemické analyzátory, POCT testy, biosenzory. 2. Metody přípravy monoklonálních a polyklonálních protilátek. Optimalizace ELISA testů, stanovení avidity protilátek. 3. Metody nespecifické izolace a purifikace imunoglobulinů a antigenů - gelová permeační chromatografie, ionexová chromatografie, centrifugační a filtrační metody, frakcionovaná precipitace, dialýza. Metody specifické izolace a purifikace imunoglobulinů a antigenů - základy afinitní chromatografie, imunomagnetická separace. 4. Elektromigrační metody - elektroforetické separace v imunochemické analýze, barvicí techniky, blottovací techniky, denzitometrické vyhodnocení, izoelektrická fokusace, vícedimenzionální metody - 2D ELFO. 5. Typy antigen vázajících molekul protilátkového základu, nové metody genového a proteinového inženýrství, techniky vyhledávání antigen vázajících molekul. Úlohy laboratoří Heterogenní kompetitivní enzymová imunoanalýza (ELISA) - kvantifikace proteinu kaseinu. Heterogenní nekompetitivní ELISA - optimalizace parametrů pro vývoj diagnostického testu. Stanovení avidity polyklonálních protilátek modifikovanou ELISA metodou. Základy bioafinitní chromatografie - izolace a purifikace IgG protilátek ze vzorku séra na koloně s imobilizovaným proteinem A. Elektromigrační metody. Polyakrylamidová gelová elektroforéza v prostředí dodecylsulfátu sodného (SDS-PAGE). Ověření čistoty frakcí IgG izolovaných pomocí afinitní chromatografie. Elektrochemická detekce - imunosenzor pro kvantifikaci antigenu.
|
|
Studijní aktivity a metody výuky
|
|
Monologická (výklad, přednáška, instruktáž), Laborování
|
|
Výstupy z učení
|
Cílem předmětu je připravit studenty pro práci v imunochemické laboratoři, při výzkumu a vývoji nových diagnostických testů, výrobě výchozích reagencií. Student získá znalosti a praktické dovednosti splňující požadavky imunoanalytické praxe. Součástí předmětu jsou semináře a bloková laboratorní cvičení zahrnující imunochemické techniky, jejich validaci a přesnou interpretaci, se zaměřením na vývoj a optimalizaci diagnostických kitů.
Student bude schopen provést analýzu biologického materiálu vhodně zvolenou metodou založenou na reakci antigenu s protilátkou, bude schopen test naplánovat, optimalizovat jeho podmínky, validovat a používat k rutinní analýze biologického materiálu.
|
|
Předpoklady
|
Student by měl mít základní znalosti z biologie, biochemie, mikrobiologie a imunologie.
|
|
Hodnoticí metody a kritéria
|
Písemná zkouška
Protokoly z laboratorních úloh (10 %), písemný závěrečný test (60 %) s následným ústním zkoušením při dosažení 60% v písemném testu.
|
|
Doporučená literatura
|
-
Návody k laboratořím dostupné ve studijní agendě (STAG)..
-
Bartůňková, Jiřina. Vyšetřovací metody v imunologii. Praha: Grada, 2005. ISBN 80-247-0691-1.
-
Johnstone A, Thorpe R. Immunochemistry in Practice.. Oxford, 1996.
-
Phillips TM. Analytical Techniques in Immunochemistry.. New York, 1992.
|