IntruMetody kultivace buněk in vitro: izolace, separace, kultivace a identifikace buněčného kmene. Vybavení a provoz buněčné laboratoře, zásady bezpečné práce s buněčnými liniemi, sterilní režim a technické zabezpečení. Příprava sterilních pufrů a kultivačních médií. Primární a nádorové buněčné linie, jejich využití v biomedicíně a v průmyslu. Podmínky kultivace suspenzní a adherentních linií - pasážování, techniky enzymatické disociace, druhy kultivačních plastů. Kryoprezervace buněk. Proliferace buněčných linií, růstová křivka, stanovení počtu, velikosti a viability buněk, kinetické charakteristiky, průtokové analyzátory buněk. Monitorování buněk v reálném čase, cytotoxicita, migrace buněk. Stanovení proliferace, indukce/inhibice apoptózy, stanovení délky telomer, stanovení proteinů, hormonů nebo cytokinů v médiu. Hodnocení mitochondriální aktivity buněk - mitochondriální respirace, mitochondriální membránový potenciál, vysokoúčinná respirometrie. Hodnocení oxidačního stresu - vysvětlení pojmů volný radikál, oxidační stres, antioxidanty (rozdělení, typy, stanovení), produkty oxidačního stresu. Průtoková cytometrie: princip, stavba průtokového cytometru, teorie kompenzace, analýza dat z průtokového cytometru. Aplikace průtokové cytometrie: fenotypizace buněčných linií, ověření diferenciace kmene, aplikace, sortování buněk pomocí FACS. Mikroskopické metody: typy mikroskopických objektů, mikroskopie světlého pole, mikroskopie v temném poli, fázově kontrastní mikroskopie, interferenční mikroskopie (Nomarského diferenciální interferenční kontrast, Hofmanův modulační kontrast). Fluorescenční mikroskopické metody, konfokální mikroskopie, multifluorescenční konfokální mikroskopie, multifotonová konfokální mikroskopie, FRAP, FRET, TIRF. Snímání a zpracování fluorescenčního obrazu: multikanálové snímání, morfometrická analýza, automatizovaná měření, měření intenzity fluorescence, 3-D rekonstrukce objektů. Intracelulární fluorescenční sondy Instrumentace v buněčné laboratoři Referáty studentů na témata dle recentních impaktovaných publikací z nakladatelství NATURE, The CELL nebo SCIENCE týykajících se metod buněčné biologie. Závěrečný test.
|
Cílem předmětu je seznámit studenty s konvenčními i moderními metodami analýzy buněk. Studenti jsou seznámeni s vybavením a provozem buněčné laboratoře a metodami prezervace a kultivace buněk in vitro. Studenti získají znalosti o základních i pokročilých metodách buněčné analýzy, včetně metod určení expresního profilu buněk a metod sloužících k hodnocení buněčné diferenciace, proliferace a apoptózy. Předmět je úvodem pro speciální předměty např. molekulárně biologické metody, kmenové buňky a tkáňové inženýrství, buněčná toxikologie, atd.
Studenti získají znalosti o základních i pokročilých metodách buněčné analýzy, včetně metod určení expresního profilu buněk a metod sloužících k hodnocení buněčné diferenciace, proliferace a apoptózy. Předmět je úvodem pro speciální předměty např. molekulárně biologické metody, kmenové buňky a tkáňové inženýrství, atd.
|
-
Alberts, Bruce . Essential cell biology. New York: Garland, 2010. ISBN 978-0-8153-4129-1.
-
Alberts, Bruce. Základy buněčné biologie : úvod do molekulární biologie buňky. Ústí nad Labem: Espero, 2005. ISBN 80-902906-2-0.
-
Freshney R.I. Culture of animal cells (A manual of basic technique and specialized application). 2015.
-
Nečas, O. a kol. Obecná biologie pro lékařské fakulty. H&H, Jinočany 2000.
-
1. Butler M. Cell culture and upstream processing. 2007.
|