|
Vyučující
|
-
Korecká Lucie, doc. RNDr. Ph.D.
|
|
Obsah předmětu
|
Časový rozvrh přednášek: Historické začlenění imunologie a imunochemie. Základní terminologie oboru. Základní složky imunitního systému, nespecifická a specifická imunita. Antigeny. Pojem antigenicita, imunogenicita, hapten, determinanta, epitop. Protilátky - struktura imunoglobulinů, funkce a význam, podstata diversity protilátek. Příprava monoklonálních a polyklonálních protilátek a jejich využití. Reakce antigen-protilátka, titr, afinita, avidita. Princip sérologických metod, aglutinační reakce, hemaglutinační reakce. Precipitační reakce v roztoku, v gelu. Imunodifúzní reakce, imunoelektroforéza, imunofixace. EIA, RIA, FIA, CLIA techniky. Princip, uspořádání, praktické příklady využití. Automatické analyzátory. Clearview screeningové testy. Metody afinitní chromatografie Elektroforetické metody s imunochemickou detekcí - SDS-PAGE, Izoelektrocká fokusace, 2D elektroforéza, immunoblotting, dot-blot Časový rozvrh laboratoří: Základní vybavení imunochemické laboratoře, bezpečnost práce. Nácvik pipetování vícekanálovou mikropipetou, ověření přesnosti a správnosti. Aglutinační reakce - typizace Salmonella typh. ve vyšetřovaných kulturách, Latex-fixační test - průkaz staphylokokových enterotoxinů A, B, RPLA test pro průkaz bakteriálních toxinů v potravinách. Imunoprecipitace v roztoku - mikroturbidimetrické stanovení verotoxinu Imunodifúzní metody - praktické použití, jednoduchá a dvojitá imunodifúze - příklady. Hemolytické metody - stanovení titru antistreptolysinových protilátek pro potvrzení bakteriální infekce Streptokoky. Enzymová imunoanalýza - Průkaz aflatoxinu a jeho kvantifikace metodou heterogenní nekompetitivní ELISA (4 hodiny). Enzymová imunoanalýza - Průkaz kaseinu a jeho kvantifikace metodou heterogenní kompetitivní ELISA (4 hodiny). Separace proteinů pomocí SDS-PAGE s následnou identifikací proteinu metodou dot-blot (4 hodiny)
|
|
Studijní aktivity a metody výuky
|
|
Monologická (výklad, přednáška, instruktáž), Demonstrace, Nácvik dovedností, Laborování
|
|
Výstupy z učení
|
Připravit studenty pro práci v imunochemické laboratoři pro analýzu potravin, znát teoreticky i prakticky základní imunochemické reakce a používat je pro analýzu potravin, průkaz patogenů, toxinů, drog apod. Absolvent předmětu by měl zvládat i práci ve výzkumu a vývoji nových diagnostických testů, výrobě výchozích reagencií.
Student bude schopen provést analýzu potravin vhodně zvolenou metodou založenou na reakci antigenu s protilátkou, bude schopen test naplánovat, optimalizovat jeho podmínky, validovat a používat k rutinní analýze biologického materiálu.
|
|
Předpoklady
|
Student by měl mít základní znalosti z biologie, biochemie I. a II, mikrobiologie.
|
|
Hodnoticí metody a kritéria
|
Písemná zkouška, Analýza výkonu studenta
Závěrečný písemný test + ústní zkoušení (pro přistoupení k ústnímu zkoušení je nutné splnit 60 % v písemném testu)
|
|
Doporučená literatura
|
-
Ferenčík M. Handbook of immunochemistry. Chapman and Hall, London, 1993.
-
Johnstone A., Thorpe R. Immunochemistry in practice, Blackwell Science, 1996.
-
Phillips T. M. Analytical Techniques in Immunochemistry, Marcel Dekker inc., 1992.
|