Úvodní informace, bezpečnost práce v laboratoři. Test pipetování, přesnost a správnost - pipetování pomocí variabilních mikropipet, spektrofotometrické ověření přesnosti a správnosti pipetování. Praktické seznámení s provozem laboratoře tkáňových kultur a buněčných linií, zásady sterilní práce v laminárním boxu, uchovávání buněk. Příprava pufrů a měření pH. Pozorování živých buněk fázovým kontrastním mikroskopem. Příprava nativního preparátu živočišné buňky (stěr bukální sliznice); fluorescenční barvení. Kultivace buněčných kultur a jejich využití v biomedicíně, princip 3R, pasážování adherentních a suspenzních linií, počítání a určování velikosti buněk, analyzátory částic. Základní charakteristika normální a nádorové buňky in vivo a in vitro. Klasifikace nádorů (benigní, maligní). Histopatologie vybraných nádorů. Vyhodnocení buněčné cytotoxicity po působení chemických a fyzikálních faktorů, pozorování suspenze buněk buněčné kultury, určování poměru živých a mrtvých buněk, smrt buňky (apoptóza, nekróza). Rozlišení živých a mrtvých buněk. Hodnocení vlivu teplotního stresu. Typy transportů přes buněčnou membránu, osmotické děje (vliv anizotonických roztoků na erytrocyty periferní lidské krve), fúze buněk. Autoagregace fosfolipidů. Indukovaná hemolýza. Plazmorhiza erytrocytů. Stanovení proteinů a izolace DNA z buněk kultivovaných in vitro (příprava buněk k analýze DNA). Stanovení koncentrace proteinů BCA. Stanovení koncentrace proteinů - Bradfordova metoda, stanovení z UV spektra, stanovení koncentrace a čistoty proteinů. Sledování toxicity různých xenobiotik metodou XTT. Testy cytotoxicity celkový přehled. Vliv cytostatik na imunokompetentní nádorové linie. Monitorování růstové kinetiky buněk v reálném čase. Metody in vitro fertilizace, zamrazení a rozmrazení buněk. Exkurze na pracoviště IVF centra. Příprava karyotypu z buněčné linie A549, rozbor metody přípravy karyotypu. Exkurze na oddělení cytogenetiky. Závěrečná písemná zkouška
|