Úvod do problematiky imunologie a imunochemie - základní terminologie, Antigeny - jejich druhy, struktura a funkce, Protilátky - imunoglobulinové třídy, struktura a funkce, Interakce protilátka - antigen, afinita, avidita, specifita, křížové reakce Izolace protilátek, jejich purifikace a charakterizace, příprava fragmentů a jejich identifikace Monoklonální protilátky, polyklonální protilátky - příprava, vlastnosti Zakladní imunochemicke techniky - aglutinace, hemaglutinace, hemolytické reakce, komplement fixační reakce, imunoturbidimetrie, imunodifuzni metody (radiální, dvojitá imunodifúze), imunoelektroforeticke metody (imunoelektroforéza, imunofixace, immunoblotting) Enzymová imunoanalýza - homogenní, heterogenní a kompetitvní, nekompetitivní uspořádání, kvalitativní a kvantitativní vyhodnocení, optimalizace Biochemické techniky používané v imunochemické laboratoři - separační a analytické metody (precipitace, ultrafiltrace, spektrofotometrie, kapalinová chromatografie, gelová permeačíi chromatografie, iontově výměnná chromatografie, bioafinitni chromatografie, elektroforetické metody) Příprava konjugátů (hapten-protein, hapten-enzym, protilátka-enzym, značení radioizotopy, fluorochromy). Použití protilátek v cytologii (imunofenotypizace), histologii Použití protilátek, imunochemických a imunologických technik v medicíně Imunoafinitní chromatografie - teorie, protilátky, způsoby imobilizace, příprava kolon, stripy, využití v praxi Proteomika, metody analýzy a identifikace proteinů, peptidů - dvoudimenzionální elektroforézy, HPLC, CZE, MS, technologie microchipů) Laboratorní úlohy: RIA metody: Stanovení celkového tyroxinu v séru. Kompetitivní metody EIA a RIA (výpočet afinitní konstanty - Scatchardova závislost). Imunoenzymová analýza: Stanovení protilátek proti bílkovinám kravského mléka metodou ELISA. Optimalizace setu - titrace antigenu, titrace konjugátu. Imunoenzymová analýza: Stanovení avidity polyklonálních protilátek metodou ELISA s chaotropní látkou. SDS - elekroforéza Stanovení molekulové hmotnosti imunoglobulinů, separace H a L řetězce a stanovení jejich molekulových hmotností. Izolelektrická fokuzace - stanovení pI vybraných proteinů-antigenů. Imunoanalytické metody: Izolace IgG metodou gelové filtrace a ionexové chromatografie na DEAE celulose. Afinitní chromatografie - izolace IgG ze séra pomocí proteinu A.
|
Připravit studenty pro práci v imunochemické laboratoři, jak ve zdravotnictví, tak ve forensním lékařství, výzkumu a vývoji nových diagnostických testů, výrobě výchozích reagencií.
Student bude schopen provést analýzu biologického materiálu vhodně zvolenou metodou založenou na reakci antigenu s protilátkou, bude schopen test naplánovat, optimalizovat jeho podmínky, validovat a používat k rutinní analýze biologického materiálu.
|
-
Bartůňková J, Paulík M. Vyšetřovací metody v imunologii, Grada, 2005.
-
Johnstone A., Thorpe R. Immunochemistry in practice, Blackwell Science, 1996.
-
Phillips T. M. Analytical Techniques in Immunochemistry, Marcel Dekker inc., 1992.
|