V této práci byly imobilizovány proteolytické enzymy trypsin a chymotrypsin pomocí kovalentní vazby na celulózová nanovlákna vyrobená firmou Elmarco technologií NanospiderTM. U těchto nově připravených nanovlákenných materiálů byly zkoumány vlastnosti důležité pro jejich praktickou aplikaci v ošetřování chronických a jiných ran, jako např. skladovací a operační stabilita imobilizovaného enzymu, proteolytická aktivita v inhibičních podmínkách nízkého pH, nízké hydratace a při teplotních změnách.
Anotace v angličtině
In this thesis there have been immobilized two proteolytic enzymes trypsin and chymotrypsin on covalent link basis to cellulose nanofibers produced by Elmarco Company using NanospiderTM technology. Properties of these newly-prepared nanofibers materials important for practical use when healing chronic and other wounds were tested e.g. storage and operation stability of immobilized enzyme, proteolytic activity on inhibitory conditions of low pH, low hydration and temperature changes.
V této práci byly imobilizovány proteolytické enzymy trypsin a chymotrypsin pomocí kovalentní vazby na celulózová nanovlákna vyrobená firmou Elmarco technologií NanospiderTM. U těchto nově připravených nanovlákenných materiálů byly zkoumány vlastnosti důležité pro jejich praktickou aplikaci v ošetřování chronických a jiných ran, jako např. skladovací a operační stabilita imobilizovaného enzymu, proteolytická aktivita v inhibičních podmínkách nízkého pH, nízké hydratace a při teplotních změnách.
Anotace v angličtině
In this thesis there have been immobilized two proteolytic enzymes trypsin and chymotrypsin on covalent link basis to cellulose nanofibers produced by Elmarco Company using NanospiderTM technology. Properties of these newly-prepared nanofibers materials important for practical use when healing chronic and other wounds were tested e.g. storage and operation stability of immobilized enzyme, proteolytic activity on inhibitory conditions of low pH, low hydration and temperature changes.
Teoretická část:
Příprava a použití vlákenných a nanovlákenných materiálů v biomedicíně (umělé orgány, tkáňové inženýrství, krevní cévy, systémy cíleného doručení léčiv, obvazoviny, dýchací masky, roušky).
Typy vazeb proteinů (enzymů) na nanovlákna - kovalentní vazba, adsorpce, zapouzdření. Výhody, nevýhody.
Praktická část:
1. Volba vhodné metody vazby v závislosti na typu funkční skupiny na nanovlákenného materiálu s cílem zachovat vysokou enzymovou aktivitu. Optimalizace množství imobilizovaného enzymu.
2. Stanovení enzymové aktivity pomocí nízkomolekulárního substrátu a dále ověření proteolytického štěpení vysokomolekulární látky. Srovnat dosaženou enzymovou aktivitu s jinými enzymovými reaktory, připravenými s např. komerčně dostupnými nosiči.
3. Stanovení množství imobilizovaného proteinu (enzymu) pomocí jiných analytických metod, např. metoda kvantifikace proteinů s využitím BCA, metoda spektrofotometrická, PAGE-ELFO, atd.
4. Testování míry nespecifické adsorpce látek proteinového charakteru na nanovlákenný materiál.
5. Studovat vliv ovlivnění anebo inhibice enzymové aktivity nanovlákenným materiálem na účinnost proteolytického štěpení substrátu.
6. Studovat stabilitu enzymové aktivity za skladovacích podmínek a pak za podmínek jiných než fyziologických (pH, iontová síla, % hydratace atd.).
Zásady pro vypracování
Teoretická část:
Příprava a použití vlákenných a nanovlákenných materiálů v biomedicíně (umělé orgány, tkáňové inženýrství, krevní cévy, systémy cíleného doručení léčiv, obvazoviny, dýchací masky, roušky).
Typy vazeb proteinů (enzymů) na nanovlákna - kovalentní vazba, adsorpce, zapouzdření. Výhody, nevýhody.
Praktická část:
1. Volba vhodné metody vazby v závislosti na typu funkční skupiny na nanovlákenného materiálu s cílem zachovat vysokou enzymovou aktivitu. Optimalizace množství imobilizovaného enzymu.
2. Stanovení enzymové aktivity pomocí nízkomolekulárního substrátu a dále ověření proteolytického štěpení vysokomolekulární látky. Srovnat dosaženou enzymovou aktivitu s jinými enzymovými reaktory, připravenými s např. komerčně dostupnými nosiči.
3. Stanovení množství imobilizovaného proteinu (enzymu) pomocí jiných analytických metod, např. metoda kvantifikace proteinů s využitím BCA, metoda spektrofotometrická, PAGE-ELFO, atd.
4. Testování míry nespecifické adsorpce látek proteinového charakteru na nanovlákenný materiál.
5. Studovat vliv ovlivnění anebo inhibice enzymové aktivity nanovlákenným materiálem na účinnost proteolytického štěpení substrátu.
6. Studovat stabilitu enzymové aktivity za skladovacích podmínek a pak za podmínek jiných než fyziologických (pH, iontová síla, % hydratace atd.).
Seznam doporučené literatury
podle pokynů vedoucího diplomové práce
Seznam doporučené literatury
podle pokynů vedoucího diplomové práce
Přílohy volně vložené
1 CD-ROM
Přílohy vázané v práci
ilustrace, grafy, tabulky
Převzato z knihovny
Ne
Plný text práce
Přílohy
Posudek(y) oponenta
Hodnocení vedoucího
Záznam průběhu obhajoby
1) Prezentace výsledků DP
2) Diskuze k posudkům vedoucího a oponenta DP
3) Diplomantka zodpověděla všechny dotazy a připomínky k DP