V této diplomové práci jsem se zabývala optimalizací syntézy fluorescenčních sond pro vysoce citlivé analýzy významných biologických molekul tvořících buněčné receptory, enzymy a jiné buněčné faktory. Jako fluorescenční materiál jsem použila nízkomolekulární fluorescenční organická barviva s vysokým kvantovým výtěžkem, např. fluorescein a rodamin nebo polovodičové kvantové tečky na bázi kadmium teluridu. Kadmium teluridové kvantové tečky slouží k přípravě nové generace fluorescenčních sond, které díky své fotostabilitě, úzkému emisnímu spektru, širokému excitačnímu spektru a snadné přípravě různých emisních vlnových délek umožňují vysoce citlivé analýzy. Syntetizované sondy jsem separovala pomocí gelové permeační chromatografie. Účinnost konjugačních reakcí s proteiny, peptidy a protilátkami jsem ověřovala pomocí kapilární zónové elektroforézy a hmotnostní spektrometrie.
Anotace v angličtině
In this thesis, I have dealt with optimizing the synthesis of fluorescent probes for highly sensitive analysis of important biological molecules forming the cell receptors, enzymes and other cellular factors. As a fluorescent material I used low molecular weight organic fluorescent dyes with high quantum yields, such as fluorescein and rhodamine, or semiconductor quantum dots based on cadmium telluride. Cadmium telluride quantum dots are used to prepare a new generation of fluorescent probes, which due to their photostability, narrow emission spectrum, a wide range of excitation spectrum and easy preparation of different emission wavelengths allow highly sensitive analysis. I separated synthesized probes using gel permeation chromatography. Effectiveness of conjugation reactions with proteins, peptides and antibodies was verified by capillary zone electrophoresis and mass spectrometry.
fluorescent probes, conjugation reactions, capillary zone electrophoreesis, mass spectrometry
Rozsah průvodní práce
-
Jazyk
CZ
Anotace
V této diplomové práci jsem se zabývala optimalizací syntézy fluorescenčních sond pro vysoce citlivé analýzy významných biologických molekul tvořících buněčné receptory, enzymy a jiné buněčné faktory. Jako fluorescenční materiál jsem použila nízkomolekulární fluorescenční organická barviva s vysokým kvantovým výtěžkem, např. fluorescein a rodamin nebo polovodičové kvantové tečky na bázi kadmium teluridu. Kadmium teluridové kvantové tečky slouží k přípravě nové generace fluorescenčních sond, které díky své fotostabilitě, úzkému emisnímu spektru, širokému excitačnímu spektru a snadné přípravě různých emisních vlnových délek umožňují vysoce citlivé analýzy. Syntetizované sondy jsem separovala pomocí gelové permeační chromatografie. Účinnost konjugačních reakcí s proteiny, peptidy a protilátkami jsem ověřovala pomocí kapilární zónové elektroforézy a hmotnostní spektrometrie.
Anotace v angličtině
In this thesis, I have dealt with optimizing the synthesis of fluorescent probes for highly sensitive analysis of important biological molecules forming the cell receptors, enzymes and other cellular factors. As a fluorescent material I used low molecular weight organic fluorescent dyes with high quantum yields, such as fluorescein and rhodamine, or semiconductor quantum dots based on cadmium telluride. Cadmium telluride quantum dots are used to prepare a new generation of fluorescent probes, which due to their photostability, narrow emission spectrum, a wide range of excitation spectrum and easy preparation of different emission wavelengths allow highly sensitive analysis. I separated synthesized probes using gel permeation chromatography. Effectiveness of conjugation reactions with proteins, peptides and antibodies was verified by capillary zone electrophoresis and mass spectrometry.
fluorescent probes, conjugation reactions, capillary zone electrophoreesis, mass spectrometry
Zásady pro vypracování
1) Teoretická část:
" Princip hmotnostní spektrometrie.
" Fyzikální a chemické principy fluorescence a luminiscence.
" Přehled moderních fluorescenčních sond.
" Metody syntézy imunofluorescenčních sond.
" Metody konjugace protilátek s fluorescenčními látkami
2) Praktická část:
" Příprava protilátek a jejich fragmentů ke konjujgaci.
" Konjugace fluorescenčních látek s protilátkami: a) orientovaná metoda přes cukernou složku protilátek,
b) metoda vazby karboxylové skupiny fluoroforu s aminoskupinou protilátky.
" Vyhodnocení účinnosti konjugace pomocí hmotnostní spektrometrie a porovnání obou metod.
" Aplikace imunofluorescenčních sond při analýze biologických vzorků.
Zásady pro vypracování
1) Teoretická část:
" Princip hmotnostní spektrometrie.
" Fyzikální a chemické principy fluorescence a luminiscence.
" Přehled moderních fluorescenčních sond.
" Metody syntézy imunofluorescenčních sond.
" Metody konjugace protilátek s fluorescenčními látkami
2) Praktická část:
" Příprava protilátek a jejich fragmentů ke konjujgaci.
" Konjugace fluorescenčních látek s protilátkami: a) orientovaná metoda přes cukernou složku protilátek,
b) metoda vazby karboxylové skupiny fluoroforu s aminoskupinou protilátky.
" Vyhodnocení účinnosti konjugace pomocí hmotnostní spektrometrie a porovnání obou metod.
" Aplikace imunofluorescenčních sond při analýze biologických vzorků.
Seznam doporučené literatury
Hermanson G. T.: Bioconjugate Techniques
Lakowicz J.R.: Principles of fluorescence spectroscopy
Seznam doporučené literatury
Hermanson G. T.: Bioconjugate Techniques
Lakowicz J.R.: Principles of fluorescence spectroscopy
Přílohy volně vložené
-
Přílohy vázané v práci
-
Převzato z knihovny
Ne
Plný text práce
Přílohy
Posudek(y) oponenta
Hodnocení vedoucího
Záznam průběhu obhajoby
1) Prezentace výsledků DP
2) Diskuze k posudkům vedoucího a oponenta DP
3) Diplomantka zodpověděla všechny dotazy a připomínky k DP