Předložená diplomová práce byla zaměřena na vývoj a optimalizaci magnetického nosiče s imobilizovanou Sfingolipid ceramid N-deacylázou. Pro katalýzu byl vybrán vhodný porézní magnetický nosič s hydroxylovou funkční skupinou. U připraveného nosiče jsme jeho enzymovou aktivitu charakterizovaly pomocí specifických substrátů Gg4Cer (gangliotetraosyl ceramid), který byl použit pro hydrolytickou reakci a lyso-Gb3Cer (lyso-ceramid trihexosid), který byl použit pro syntetickou reakci. U tohoto nosiče byla také testována operační a skladovací stabilita. Další část diplomové práce byla zaměřena na porovnávání enzymové aktivity solubilní a imobilizované formy Sfingolipid ceramid N-deacylázy v závislosti na teplotě a složení reakčního média. Byly tak určeny vhodné podmínky pro reakci katalyzovanou Sfingolipid ceramid N-deacylázou. Dále naměřené hodnoty byly použity ke stanovení KM pro substrát Gg4Cer (lyso-Gb3Cer). Vzorky byly analyzovány metodou chromatografie na tenké vrstvě s denzitometrickým vyhodnocením a též hmotností spektrometrií.
Anotace v angličtině
Presented diploma thesis was focused on development and optimization of Sphingolipid ceramide N-deacylase in magnetic carries. Porous magnetic particle with hydroxyl function group was chosen. We were characterized enzymatic aktivity of carrier by the specific substrate, Gg4Cer (gangliotetraosyl ceramide) for hydrolytic reaction and lyso-Gb3Cer (lyso-ceramide trihexoside) for reverse reaction. The storage and operational stability was also determined at this carrier. Next part of diploma thesis was focused on matching enzymatic activity soluble and immobilized Sphingolipid ceramide N-deacylase depending on temperature and composition of reaction medium. Acceptable conditions for activity of Sphingolipid ceramide N-deacylase were defined. Furthermore we tried to determine value of KM for substrate Gg4Cer and lyso-Gb3Cer. Samples were analyzed by technique thin layer chromatography with densitometric evaluation and by mass spectrometry.
sphingolipids, Sphingolipid ceramide N-deacylase, magnetic carrier, covalent bound
Rozsah průvodní práce
-
Jazyk
CZ
Anotace
Předložená diplomová práce byla zaměřena na vývoj a optimalizaci magnetického nosiče s imobilizovanou Sfingolipid ceramid N-deacylázou. Pro katalýzu byl vybrán vhodný porézní magnetický nosič s hydroxylovou funkční skupinou. U připraveného nosiče jsme jeho enzymovou aktivitu charakterizovaly pomocí specifických substrátů Gg4Cer (gangliotetraosyl ceramid), který byl použit pro hydrolytickou reakci a lyso-Gb3Cer (lyso-ceramid trihexosid), který byl použit pro syntetickou reakci. U tohoto nosiče byla také testována operační a skladovací stabilita. Další část diplomové práce byla zaměřena na porovnávání enzymové aktivity solubilní a imobilizované formy Sfingolipid ceramid N-deacylázy v závislosti na teplotě a složení reakčního média. Byly tak určeny vhodné podmínky pro reakci katalyzovanou Sfingolipid ceramid N-deacylázou. Dále naměřené hodnoty byly použity ke stanovení KM pro substrát Gg4Cer (lyso-Gb3Cer). Vzorky byly analyzovány metodou chromatografie na tenké vrstvě s denzitometrickým vyhodnocením a též hmotností spektrometrií.
Anotace v angličtině
Presented diploma thesis was focused on development and optimization of Sphingolipid ceramide N-deacylase in magnetic carries. Porous magnetic particle with hydroxyl function group was chosen. We were characterized enzymatic aktivity of carrier by the specific substrate, Gg4Cer (gangliotetraosyl ceramide) for hydrolytic reaction and lyso-Gb3Cer (lyso-ceramide trihexoside) for reverse reaction. The storage and operational stability was also determined at this carrier. Next part of diploma thesis was focused on matching enzymatic activity soluble and immobilized Sphingolipid ceramide N-deacylase depending on temperature and composition of reaction medium. Acceptable conditions for activity of Sphingolipid ceramide N-deacylase were defined. Furthermore we tried to determine value of KM for substrate Gg4Cer and lyso-Gb3Cer. Samples were analyzed by technique thin layer chromatography with densitometric evaluation and by mass spectrometry.
sphingolipids, Sphingolipid ceramide N-deacylase, magnetic carrier, covalent bound
Zásady pro vypracování
Teoretická část:
" význam a funkce sfingolipidů,
" strukturní a funkční charakterizace enzymu SCDázy,
" enzymové systémy s kovalentně vázanými enzymy se zaměřením na magnetické materiály.
Praktická část:
" kovalentní vazba enzymu SCDasy,
" katalýza přeměny vybraných látek magneticky aktivním nosičem s imobilizovanmým enzymem,
" charakterizace imobilizovaného enzymu - nosiče: enzymatická aktivita vztažena na mg nosiče,
hledání optimálních podmínek katalýzy pro volný a pro vázaný enzym (teplota, složení reakčního média, Km, stabilita operační, skladovací)
" charakterizace reakce katalyzované katalýzy volným a vázaným enzymem,
" popis hydrolýzy i syntézy, podmínek rovnovážné reakce.
Použité experimentální metody budou: elektroforetické separační metody, metody spektrální analýzy, HPTLC, MS. K vyhodnocování výsledků bude studnentka používat odpovídající databáze a softwary.
Zásady pro vypracování
Teoretická část:
" význam a funkce sfingolipidů,
" strukturní a funkční charakterizace enzymu SCDázy,
" enzymové systémy s kovalentně vázanými enzymy se zaměřením na magnetické materiály.
Praktická část:
" kovalentní vazba enzymu SCDasy,
" katalýza přeměny vybraných látek magneticky aktivním nosičem s imobilizovanmým enzymem,
" charakterizace imobilizovaného enzymu - nosiče: enzymatická aktivita vztažena na mg nosiče,
hledání optimálních podmínek katalýzy pro volný a pro vázaný enzym (teplota, složení reakčního média, Km, stabilita operační, skladovací)
" charakterizace reakce katalyzované katalýzy volným a vázaným enzymem,
" popis hydrolýzy i syntézy, podmínek rovnovážné reakce.
Použité experimentální metody budou: elektroforetické separační metody, metody spektrální analýzy, HPTLC, MS. K vyhodnocování výsledků bude studnentka používat odpovídající databáze a softwary.
Seznam doporučené literatury
podle pokynů vedoucího diplomové práce
Seznam doporučené literatury
podle pokynů vedoucího diplomové práce
Přílohy volně vložené
-
Přílohy vázané v práci
-
Převzato z knihovny
Ne
Plný text práce
Přílohy
Posudek(y) oponenta
Hodnocení vedoucího
Záznam průběhu obhajoby
1) Prezentace výsledků DP
2) Diskuze k posudkům vedoucího a oponenta DP
3) Diplomantka zodpověděla všechny dotazy a připomínky k DP