Diplomová práce se zabývá sledováním vlivu imunomodulačního preparátu JUWIM? (JW) na buňky imunitního systému. Jako zástupce T lymfocytů byla použita suspenzní nádorová buněčná linie JURKAT. Jako zástupce monocyto-makrofágové linie byla použita suspenzní nádorová linie U-937, která byla v přítomnosti 1,25% DMSO diferencovaná do stádia monocytů. Buněčné linie JURKAT i U-937 byly ovlivněny JW a byly stimulovány prozánětlivými cytokiny IL-1beta a IL-6. Metodou ELISA byla stanovena koncentrace prozánětlivých i protizánětlivých cytokinů produkovaných ovlivněnými i neovlivněnými buňkami. Stanovované cytokiny byly IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, TNFalfa a INFgama.
Anotace v angličtině
This diploma thesis deals with monitoring the effect of immunomodulatory agent JUWIM? (JW) on cells of the immune system. Tumor suspension cell line Jurkat was used as a model of the T cells. Monocyte-macrophage-like cell lines were represented by tumor suspension cell line U-937, which was differentiated in the presence of 1.25% DMSO to the stage of monocytes. Jurkat and U-937 cell lines were affected by JW and inflammation was stimulated by proinflammatory cytokines IL-1beta and IL-6. ELISA was used to determine the concentration of proinflammatory and antiinflammatory cytokines produced by affected and non-affected cells. Cytokines IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, TNFalfa and INFgama were investigated.
Klíčová slova
JUWIM; Jurkat; U-937; cytokiny; ELISA metoda
Klíčová slova v angličtině
JUWIM; Jurkat; U-937; cytokines; ELISA method
Rozsah průvodní práce
-
Jazyk
CZ
Anotace
Diplomová práce se zabývá sledováním vlivu imunomodulačního preparátu JUWIM? (JW) na buňky imunitního systému. Jako zástupce T lymfocytů byla použita suspenzní nádorová buněčná linie JURKAT. Jako zástupce monocyto-makrofágové linie byla použita suspenzní nádorová linie U-937, která byla v přítomnosti 1,25% DMSO diferencovaná do stádia monocytů. Buněčné linie JURKAT i U-937 byly ovlivněny JW a byly stimulovány prozánětlivými cytokiny IL-1beta a IL-6. Metodou ELISA byla stanovena koncentrace prozánětlivých i protizánětlivých cytokinů produkovaných ovlivněnými i neovlivněnými buňkami. Stanovované cytokiny byly IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, TNFalfa a INFgama.
Anotace v angličtině
This diploma thesis deals with monitoring the effect of immunomodulatory agent JUWIM? (JW) on cells of the immune system. Tumor suspension cell line Jurkat was used as a model of the T cells. Monocyte-macrophage-like cell lines were represented by tumor suspension cell line U-937, which was differentiated in the presence of 1.25% DMSO to the stage of monocytes. Jurkat and U-937 cell lines were affected by JW and inflammation was stimulated by proinflammatory cytokines IL-1beta and IL-6. ELISA was used to determine the concentration of proinflammatory and antiinflammatory cytokines produced by affected and non-affected cells. Cytokines IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, TNFalfa and INFgama were investigated.
Klíčová slova
JUWIM; Jurkat; U-937; cytokiny; ELISA metoda
Klíčová slova v angličtině
JUWIM; Jurkat; U-937; cytokines; ELISA method
Zásady pro vypracování
1) Teoretická část:
Základní informace o imunokompetentních buňkách, o informačních molekulách, které produkují, o cytokinech. Existují určité cytokiny, které jsou buňkami produkovány po jejich aktivaci během kultivace in vitro. Tyto buňky lze vystavit účinkům různých látek (toxiny, stimulátory, superantigeny, patogeny, atd.), buňky na to reagují, mj. začnou produkovat cytokiny. Popsat jaké cytokiny buňky po aktivaci či stresu produkují, a jak zjistit, jaký účinek dané látky na buňky mají.
V další části budou popsány a zhodnoceny všechny metody, kterými lze produkci cytokinů buňkami pěstovaných v kulturách monitorovat a kvantifikovat.
2) Praktická část:
1. Seznámit se s kultivačními protokoly suspenzních a adherentních buněčných linií. Osvojit si postupy počítání buněk, rozmrazovaní, zamrazování a jejich pasážování.
2. Samostatně pracovat se suspenzními buněčnými liniemi Jurkat a U-937.
3. Nalezení optimální koncentrace testovaného preparátu Juwim a doby vhodné k ovlivnění buněk Juwimem a jeho dvou modifikací metodou buněčné proliferace (XTT test). Stimulace zánětu in vitro pomocí cytokinů IL-1\recke{beta} a IL-6.
4. Ovlivnění buněk U-937 a Jurkat vybranými koncentracemi Juwimů.
5. Zavedení a optimalizace metod pro průkaz a kvantifikaci cytokinů, ELISA metody, optimalizovat podmínky přípravy vyšetřovaného vzorku (preanalytická fáze, včetně uchovávání vzorku dlouhodobé, krátkodobé).
6. Průkaz vybraných markerů IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, INF gama a TNF alfa na úrovni proteinu metou ELISA u buněk U937 a Jurkat ovlivněnými testovanými preparáty.
7. Vyhodnocení výsledků a diskuze.
Zásady pro vypracování
1) Teoretická část:
Základní informace o imunokompetentních buňkách, o informačních molekulách, které produkují, o cytokinech. Existují určité cytokiny, které jsou buňkami produkovány po jejich aktivaci během kultivace in vitro. Tyto buňky lze vystavit účinkům různých látek (toxiny, stimulátory, superantigeny, patogeny, atd.), buňky na to reagují, mj. začnou produkovat cytokiny. Popsat jaké cytokiny buňky po aktivaci či stresu produkují, a jak zjistit, jaký účinek dané látky na buňky mají.
V další části budou popsány a zhodnoceny všechny metody, kterými lze produkci cytokinů buňkami pěstovaných v kulturách monitorovat a kvantifikovat.
2) Praktická část:
1. Seznámit se s kultivačními protokoly suspenzních a adherentních buněčných linií. Osvojit si postupy počítání buněk, rozmrazovaní, zamrazování a jejich pasážování.
2. Samostatně pracovat se suspenzními buněčnými liniemi Jurkat a U-937.
3. Nalezení optimální koncentrace testovaného preparátu Juwim a doby vhodné k ovlivnění buněk Juwimem a jeho dvou modifikací metodou buněčné proliferace (XTT test). Stimulace zánětu in vitro pomocí cytokinů IL-1\recke{beta} a IL-6.
4. Ovlivnění buněk U-937 a Jurkat vybranými koncentracemi Juwimů.
5. Zavedení a optimalizace metod pro průkaz a kvantifikaci cytokinů, ELISA metody, optimalizovat podmínky přípravy vyšetřovaného vzorku (preanalytická fáze, včetně uchovávání vzorku dlouhodobé, krátkodobé).
6. Průkaz vybraných markerů IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, INF gama a TNF alfa na úrovni proteinu metou ELISA u buněk U937 a Jurkat ovlivněnými testovanými preparáty.
7. Vyhodnocení výsledků a diskuze.
Seznam doporučené literatury
Podle pokynů vedoucího diplomové práce.
Seznam doporučené literatury
Podle pokynů vedoucího diplomové práce.
Přílohy volně vložené
-
Přílohy vázané v práci
-
Převzato z knihovny
Ne
Plný text práce
Přílohy
Posudek(y) oponenta
Hodnocení vedoucího
Záznam průběhu obhajoby
1. Prezentace výsledků diplomové práce
2. Diskuze k posudkům vedoucího a oponenta diplomové práce
3. Diplomantka zodpověděla všechny dotazy a připomínky k DP