Eluční účinky chaotropních látek a detergentů jsou využívány v celé řadě imunoanalytických metod. Tato práce se zabývá určením elučního účinku vybraných chaotropních látek a detergentů v různých reakčních podmínkách. Jako detekční systém pro sledování míry rozvolnění specifických vazeb mezi antigeny a protilátkami byla zvolena klasická sendvičová metoda ELISA v systému alfa-chymotrypsin - prasečí protilátky třídy IgG se specifitou proti alfa-chymotrypsinu. Vazebná aktivita protilátek k antigenům byla vyjádřena pomocí tzv. aviditních indexů. V závěru práce bylo ověřováno, zda efektivní eluční podmínky nepoškozují aktivitu ovlivněného alfa-chymotrypsinu. Pro toto hodnocení byl použit enzym kovalentně vázaný na magnetické částice Si-MAG Carboxyl.
Anotace v angličtině
The elution effects of chaotropic agents and detergents are broadly applied in the various immunoanalytical methods. This work is concerned with determination of elution effect of some selected chaotropic compounds and detergents under the chemically different reaction conditions. Classical sandwich-type ELISA method based on biospecific pair alfa-chymotrypsin - swine anti-chymotrypsin antibody is chosen as detection system for measuring of specific non-covalent interactions between antigen and antibody. Efficiency of biospecific interactions were determined by so-called avidity described as avidity index. At the end of the research it was verified whether the effective elution conditions could negatively influence the biological activity of released alfa-chymotrypsin. For that purposes the enzyme immobilized covalently to magnetic particles Si-MAG Carboxyl was used.
Eluční účinky chaotropních látek a detergentů jsou využívány v celé řadě imunoanalytických metod. Tato práce se zabývá určením elučního účinku vybraných chaotropních látek a detergentů v různých reakčních podmínkách. Jako detekční systém pro sledování míry rozvolnění specifických vazeb mezi antigeny a protilátkami byla zvolena klasická sendvičová metoda ELISA v systému alfa-chymotrypsin - prasečí protilátky třídy IgG se specifitou proti alfa-chymotrypsinu. Vazebná aktivita protilátek k antigenům byla vyjádřena pomocí tzv. aviditních indexů. V závěru práce bylo ověřováno, zda efektivní eluční podmínky nepoškozují aktivitu ovlivněného alfa-chymotrypsinu. Pro toto hodnocení byl použit enzym kovalentně vázaný na magnetické částice Si-MAG Carboxyl.
Anotace v angličtině
The elution effects of chaotropic agents and detergents are broadly applied in the various immunoanalytical methods. This work is concerned with determination of elution effect of some selected chaotropic compounds and detergents under the chemically different reaction conditions. Classical sandwich-type ELISA method based on biospecific pair alfa-chymotrypsin - swine anti-chymotrypsin antibody is chosen as detection system for measuring of specific non-covalent interactions between antigen and antibody. Efficiency of biospecific interactions were determined by so-called avidity described as avidity index. At the end of the research it was verified whether the effective elution conditions could negatively influence the biological activity of released alfa-chymotrypsin. For that purposes the enzyme immobilized covalently to magnetic particles Si-MAG Carboxyl was used.
Teoretická část:
Základní informace o principu imunoanalytických metod, přehled metod vhodných pro stanovení avidity polyklonálních protilátek, podmínky tvorby a rozpadu imunokomplexů.
Využití IA metod pro charakterizaci stability imunokomplexů.
Experimentální část bude obsahovat dílčí kroky:
Cílem diplomové práce je použít metodu ELISA v klasickém sendvičovém uspořádání pro charakterizaci stability imunokomplexů a hledání podmínek eluce, za kterých dojde k efektivnímu rozvolněné IK.
Úkolem je zavedení metody ELISA spolu s optimalizací jednotlivých reagencií, nastavení podmínek pro rozvolňování IK, použití detergentů různé chemické povahy pro rozvolnění imunokomplexů a zhodnocení denaturačního efektu na bioaktivní antigen.
Zásady pro vypracování
Teoretická část:
Základní informace o principu imunoanalytických metod, přehled metod vhodných pro stanovení avidity polyklonálních protilátek, podmínky tvorby a rozpadu imunokomplexů.
Využití IA metod pro charakterizaci stability imunokomplexů.
Experimentální část bude obsahovat dílčí kroky:
Cílem diplomové práce je použít metodu ELISA v klasickém sendvičovém uspořádání pro charakterizaci stability imunokomplexů a hledání podmínek eluce, za kterých dojde k efektivnímu rozvolněné IK.
Úkolem je zavedení metody ELISA spolu s optimalizací jednotlivých reagencií, nastavení podmínek pro rozvolňování IK, použití detergentů různé chemické povahy pro rozvolnění imunokomplexů a zhodnocení denaturačního efektu na bioaktivní antigen.
Seznam doporučené literatury
Podle pokynů vedoucího diplomové práce.
Seznam doporučené literatury
Podle pokynů vedoucího diplomové práce.
Přílohy volně vložené
-
Přílohy vázané v práci
-
Převzato z knihovny
Ne
Plný text práce
Přílohy
Posudek(y) oponenta
Hodnocení vedoucího
Záznam průběhu obhajoby
1. Prezentace výsledků diplomové práce
2. Diskuze k posudkům vedoucího a oponenta diplomové práce
3. Diplomantka zodpověděla všechny dotazy a připomínky k DP