V naší práci jsme studovali vliv inhibitoru ATM kinázy (KU 55933), inhibitoru ATR kinázy (VE-821) a DNA-PK (NU 7441) na lidské fibroblasty BJ a NHLF, vystavené různým dávkám gama záření 60Co. Testovali jsme hypotézu, že inhibitory zvyšují citlivost fibroblastů na ionizující záření.Pozorovali jsme cytotoxický efekt inhibitoru KU 55933 i u neozářených buněk. Z hlediska inhibice reparace radiačního poškození měl největší efekt na lidské fibroblasty inhibitor DNA-PK, NU 7441.
Anotace v angličtině
In our work we studied the effects of inhibitor of ATM kinase (KU 55933), inhibitor of ATR kinase (VE-821) and DNA-PK (NU 7441) on human fibroblasts BJ and NHLF, exposed to various doses of gamma radiation of 60Co. We tested the hypothesis that inhibitors enhance the sensitivity of fibroblast to ionizing radiation.We observed cytotoxic effect of the inhibitor KU 55933 at non-irradiated fibroblasts. From the viewpoint of inhibition of the radiation damage repair had the greatest effect on human fibroblasts inhibitor of DNA-PK, NU7441.
Klíčová slova
VE-821, NU 7441, KU 55933, ATM, ATR, DNA-PK, ionizující, záření, DSB, fibroblasty
Klíčová slova v angličtině
VE-821, NU 7441, KU 55933, ATM, ATR, DNA-PK, ionizing ,diation, DSB, fibroblasts
Rozsah průvodní práce
-
Jazyk
CZ
Anotace
V naší práci jsme studovali vliv inhibitoru ATM kinázy (KU 55933), inhibitoru ATR kinázy (VE-821) a DNA-PK (NU 7441) na lidské fibroblasty BJ a NHLF, vystavené různým dávkám gama záření 60Co. Testovali jsme hypotézu, že inhibitory zvyšují citlivost fibroblastů na ionizující záření.Pozorovali jsme cytotoxický efekt inhibitoru KU 55933 i u neozářených buněk. Z hlediska inhibice reparace radiačního poškození měl největší efekt na lidské fibroblasty inhibitor DNA-PK, NU 7441.
Anotace v angličtině
In our work we studied the effects of inhibitor of ATM kinase (KU 55933), inhibitor of ATR kinase (VE-821) and DNA-PK (NU 7441) on human fibroblasts BJ and NHLF, exposed to various doses of gamma radiation of 60Co. We tested the hypothesis that inhibitors enhance the sensitivity of fibroblast to ionizing radiation.We observed cytotoxic effect of the inhibitor KU 55933 at non-irradiated fibroblasts. From the viewpoint of inhibition of the radiation damage repair had the greatest effect on human fibroblasts inhibitor of DNA-PK, NU7441.
Klíčová slova
VE-821, NU 7441, KU 55933, ATM, ATR, DNA-PK, ionizující, záření, DSB, fibroblasty
Klíčová slova v angličtině
VE-821, NU 7441, KU 55933, ATM, ATR, DNA-PK, ionizing ,diation, DSB, fibroblasts
Zásady pro vypracování
1. Proveďte literární rešerši a popište současný stav poznání o radiosenzitivitě jednotlivých buněk v lidském organismu. Popište význam reparačních mechanismů pro přežití normálních buněk a ohledem na DNA-PK, ATM a ATR kinasy. Popište možnosti inhibice těchto kinas a po ozáření a srovnejte vliv na fibroblasty a nádorové buňky při radioterapii.
2. Osvojte si techniku práce s normálními lidskými plicními fibroblasty, jejich kultivaci a pasážování.
3. Zhodnoťte vliv inhibitorů DNA-PK (NU7441), ATM kinasy (KU55933) a ATR kinasy (VE821) na proliferační aktivitu ozářených fibroblastů.
4. Osvojte si práci s průtokovým cytometrem a popište vliv inhibitorů na ozářené buňky a změny v zastoupení buněk v buněčném cyklu.
5. Osvojte si práci s fluorescenčním mikroskopem a popište vliv inhibitorů DNA na ozářené buňky a změny v kolokalizaci gamaH2AX a 53BP1 v jednotlivých buňkách.
6. Stanovte změny vybraných proteinů 2 h po ozáření pomocí metody western blot.
7. Naměřené hodnoty statisticky zpracujte a ze získaných výsledků vyvoďte, zda ovlivňují vybrané inhibitory radiosenzitivitu normálních lidských plicních fibroblastů.
Zásady pro vypracování
1. Proveďte literární rešerši a popište současný stav poznání o radiosenzitivitě jednotlivých buněk v lidském organismu. Popište význam reparačních mechanismů pro přežití normálních buněk a ohledem na DNA-PK, ATM a ATR kinasy. Popište možnosti inhibice těchto kinas a po ozáření a srovnejte vliv na fibroblasty a nádorové buňky při radioterapii.
2. Osvojte si techniku práce s normálními lidskými plicními fibroblasty, jejich kultivaci a pasážování.
3. Zhodnoťte vliv inhibitorů DNA-PK (NU7441), ATM kinasy (KU55933) a ATR kinasy (VE821) na proliferační aktivitu ozářených fibroblastů.
4. Osvojte si práci s průtokovým cytometrem a popište vliv inhibitorů na ozářené buňky a změny v zastoupení buněk v buněčném cyklu.
5. Osvojte si práci s fluorescenčním mikroskopem a popište vliv inhibitorů DNA na ozářené buňky a změny v kolokalizaci gamaH2AX a 53BP1 v jednotlivých buňkách.
6. Stanovte změny vybraných proteinů 2 h po ozáření pomocí metody western blot.
7. Naměřené hodnoty statisticky zpracujte a ze získaných výsledků vyvoďte, zda ovlivňují vybrané inhibitory radiosenzitivitu normálních lidských plicních fibroblastů.
Seznam doporučené literatury
Podle pokynů vedoucího diplomové práce.
Seznam doporučené literatury
Podle pokynů vedoucího diplomové práce.
Přílohy volně vložené
-
Přílohy vázané v práci
-
Převzato z knihovny
Ne
Plný text práce
Přílohy
Posudek(y) oponenta
Hodnocení vedoucího
Záznam průběhu obhajoby
1. Prezentace výsledků diplomové práce
2. Diskuze k posudkům vedoucího a oponenta diplomové práce
3. Diplomantka zodpověděla všechny dotazy a připomínky k DP