Mouse lymphoma assay je in vitro toxikologický test využívající k testování potenciálního genotoxického účinku chemických látek savčích buněk. Těmito buňkami jsou buňky myší lymfomatické buněčné linie L5178Y/Tk+/- -3.7.2.C.
V důsledku působení toxické látky dochází ke ztrátě alely pro tymidinkinázu a tím i schopnosti ji produkovat. Takové mutantní buňky jsou pomocí pyrimidinového analogu trifluortymidinu selektovány a na základě jejich růstu se posléze určuje míra toxicity látky.
Testovanými látkami byly: kyselina mukobromová, formaldehyd a cyklofosfamid a kolchicin jako pozitivní kontrola.
Metoda MLA byla porovnána z hlediska náročnosti na přípravu, časové náročnosti a náchylnosti ke kontaminaci a v důsledku toho i ke zkreslení výsledků s metodami jiných testů určených k testování možné genotoxicity chemických látek, jako jsou in vitro mikronukleus test.
V provedeném in vitro mikronukleus testu vykázala koncentrace formaldehydu 0,02 ?l/ml pozitivní výsledek, tj. dvojnásobné zvýšení výskytu aberací oproti negativní kontrole bez MAS. Vyšší koncentrace formaldehydu byly silně cytotoxické. Předpokládaná toxicit kyseliny mukobromové nebyla prokázána.
Anotace v angličtině
Mouse lymphoma assay is in vitro toxicology test that uses mammalian cells for testing potential genotoxic effects of chemicals. In this test are used of L5178Y/Tk+/- -3.7.2.C mouse lymphoma cell line.
The toxic substances caused defection of thymidin kinase allele and cells have not ability to produce it. These mutant cells are selected by pyrimidine analog trifluorothymidine and on the basis of the cell growth rate is than finally identified a level of the toxicity of the substance.
The tested chemical substances were: mucobromic acid, formaldehyde and cyklophosphamide with colchicine as positive controls.
Method of mouse lymphoma assay was confronted with methods of other test of genotoxicity like in vitro mammalian cell micronucleus test in light of heftiness on disposition, time disposition and disposition to contamination that caused distortion results.
In in vitro mammalian cell micronucleus test was formaldehyde concetration 0,02 ?l/ml positive i. e. formaldehyde induced significant increase of chromosomal aberation compared with negative control without MAS. Higher formaldehyde concetrations were cytotoxic. Mucobromic acid was negative in in vitro mammalian cell micronucleus test.
In vitro mikronukleus test, mouse lymphoma assay, tests of genotoxicity, chromosomal aberation.
Rozsah průvodní práce
-
Jazyk
CZ
Anotace
Mouse lymphoma assay je in vitro toxikologický test využívající k testování potenciálního genotoxického účinku chemických látek savčích buněk. Těmito buňkami jsou buňky myší lymfomatické buněčné linie L5178Y/Tk+/- -3.7.2.C.
V důsledku působení toxické látky dochází ke ztrátě alely pro tymidinkinázu a tím i schopnosti ji produkovat. Takové mutantní buňky jsou pomocí pyrimidinového analogu trifluortymidinu selektovány a na základě jejich růstu se posléze určuje míra toxicity látky.
Testovanými látkami byly: kyselina mukobromová, formaldehyd a cyklofosfamid a kolchicin jako pozitivní kontrola.
Metoda MLA byla porovnána z hlediska náročnosti na přípravu, časové náročnosti a náchylnosti ke kontaminaci a v důsledku toho i ke zkreslení výsledků s metodami jiných testů určených k testování možné genotoxicity chemických látek, jako jsou in vitro mikronukleus test.
V provedeném in vitro mikronukleus testu vykázala koncentrace formaldehydu 0,02 ?l/ml pozitivní výsledek, tj. dvojnásobné zvýšení výskytu aberací oproti negativní kontrole bez MAS. Vyšší koncentrace formaldehydu byly silně cytotoxické. Předpokládaná toxicit kyseliny mukobromové nebyla prokázána.
Anotace v angličtině
Mouse lymphoma assay is in vitro toxicology test that uses mammalian cells for testing potential genotoxic effects of chemicals. In this test are used of L5178Y/Tk+/- -3.7.2.C mouse lymphoma cell line.
The toxic substances caused defection of thymidin kinase allele and cells have not ability to produce it. These mutant cells are selected by pyrimidine analog trifluorothymidine and on the basis of the cell growth rate is than finally identified a level of the toxicity of the substance.
The tested chemical substances were: mucobromic acid, formaldehyde and cyklophosphamide with colchicine as positive controls.
Method of mouse lymphoma assay was confronted with methods of other test of genotoxicity like in vitro mammalian cell micronucleus test in light of heftiness on disposition, time disposition and disposition to contamination that caused distortion results.
In in vitro mammalian cell micronucleus test was formaldehyde concetration 0,02 ?l/ml positive i. e. formaldehyde induced significant increase of chromosomal aberation compared with negative control without MAS. Higher formaldehyde concetrations were cytotoxic. Mucobromic acid was negative in in vitro mammalian cell micronucleus test.
In vitro mikronukleus test, mouse lymphoma assay, tests of genotoxicity, chromosomal aberation.
Zásady pro vypracování
1) Teoretická část:
" Rešeržní zpracování teoretických podkladů popisujících dělení buněk a souvisejících molekulárně genetických mechanismů, které jsou základem k pochopení podstaty metody MLA.
" Teoretické seznámení s metodikou MLA testu dle směrnic OECD a FDA.
" Studium dostupné literatury a pramenů (PubMed, Web of Science, ECVAM)
2) Praktická část:
" Účast při MLA testech. Práce s buněčnými kulturami, příprava preparátů.
" Praktické provedení MLA testu s vybranými látkami.
" Hodnocení preparátů - plotniček z MLA testu.
" Zhodnocení metody, výhody a nevýhody v porovnání s jinýmy testy genotoxicity.
Zásady pro vypracování
1) Teoretická část:
" Rešeržní zpracování teoretických podkladů popisujících dělení buněk a souvisejících molekulárně genetických mechanismů, které jsou základem k pochopení podstaty metody MLA.
" Teoretické seznámení s metodikou MLA testu dle směrnic OECD a FDA.
" Studium dostupné literatury a pramenů (PubMed, Web of Science, ECVAM)
2) Praktická část:
" Účast při MLA testech. Práce s buněčnými kulturami, příprava preparátů.
" Praktické provedení MLA testu s vybranými látkami.
" Hodnocení preparátů - plotniček z MLA testu.
" Zhodnocení metody, výhody a nevýhody v porovnání s jinýmy testy genotoxicity.
Seznam doporučené literatury
1) OECD Guidelines for Testing of Chemicals 476 (1997), In Vitro Mammalian Cell Gene Mutation Test
2) REDBOOK 2000: IV.C.1.C Mouse Lymphoma Thymidine Kinase Gene Mutation Test, FDA, 2001
3) Yan Z., Caldwell G.W., Methods in Pharmacology and Toxicology, Human Press Inc., Totowa, NJ
4) Freshney I.R., Culture of Animal Cells:a Manual of Basic Techniques, John Wiley & Sons, 2005
Seznam doporučené literatury
1) OECD Guidelines for Testing of Chemicals 476 (1997), In Vitro Mammalian Cell Gene Mutation Test
2) REDBOOK 2000: IV.C.1.C Mouse Lymphoma Thymidine Kinase Gene Mutation Test, FDA, 2001
3) Yan Z., Caldwell G.W., Methods in Pharmacology and Toxicology, Human Press Inc., Totowa, NJ
4) Freshney I.R., Culture of Animal Cells:a Manual of Basic Techniques, John Wiley & Sons, 2005
Přílohy volně vložené
-
Přílohy vázané v práci
-
Převzato z knihovny
Ne
Plný text práce
Přílohy
Posudek(y) oponenta
Hodnocení vedoucího
Záznam průběhu obhajoby
1. Prezentace výsledků diplomové práce
2. Diskuze k posudkům vedoucího a oponenta diplomové práce
3. Diplomantka zodpověděla všechny dotazy a připomínky k DP