Disertační práce se zabývá vývojem a využitím kapilárních metod (konkrétně kapilární
elektroforézy, kapilární elektrochromatografie a nanokapalinové chromatografie) ke studiu
modifikací vznikajících u vybraných bílkovin (konkrétně hovězího sérového albuminu,
lidského sérového albuminu, lidského transferinu) v důsledku neenzymatické glykace.
V teoretické části jsou shrnuty poznatky o neenzymatické glykaci bílkovin, jejím
průběhu, výsledných produktech a významu této reakce pro živý organismus. Dále se věnuje
principům kapilární elektroforézy a nanokapalinové chromatografie a jejich využití
v proteomice.
Experimentální část seznamuje s použitými chemikáliemi, instrumentací, metodami a
postupy příprav jednotlivých vzorků používaných pro tyto studie.
Výsledky a diskuze shrnují dosažené výsledky a poznatky a jsou rozděleny na 3 části: (i)
studium modifikace hovězího sérového albuminu oxo-sloučeninami, (ii) kapilární
elektrochromatografie v otevřené kapiláře s navázanými zlatými nanočásticemi, (iii) nové
monotopické neenzymatické modifikace vzniklé reakcí albuminu s ribózou.
Anotace v angličtině
This thesis deals with the development and utilization of capillary methods (specifically
capillary electrophoresis, capillary electrochromatography and nanoliquid chromatography) to
study modifications resulting in selected proteins (specifically bovine serum albumin, human
serum albumin, human transferrin) due to the non-enzymatic glycation.
Knowledge of the non-enzymatic glycation of proteins are summarized in the theoretical
part, along with the reaction course, the resulting products and the importance of this reaction
to living organisms. It also discusses the principles of capillary electrophoresis and nanoliquid
chromatography and their applications in proteomics.
Experimental section acquainted with the chemicals used, instrumentation, methods and
procedures of preparation of the samples used for these studies.
Results and discussion summarize the results and findings and are divided snto 3 parts: (i)
the study of modifications of bovine serum albumin by oxo-compounds, (ii) capillary
electrochromatography in open tubular capillary coated with gold nanoparticles, (iii) new
monotopic non-enzymatic modification formed by the reaction of albumin with ribose.
Disertační práce se zabývá vývojem a využitím kapilárních metod (konkrétně kapilární
elektroforézy, kapilární elektrochromatografie a nanokapalinové chromatografie) ke studiu
modifikací vznikajících u vybraných bílkovin (konkrétně hovězího sérového albuminu,
lidského sérového albuminu, lidského transferinu) v důsledku neenzymatické glykace.
V teoretické části jsou shrnuty poznatky o neenzymatické glykaci bílkovin, jejím
průběhu, výsledných produktech a významu této reakce pro živý organismus. Dále se věnuje
principům kapilární elektroforézy a nanokapalinové chromatografie a jejich využití
v proteomice.
Experimentální část seznamuje s použitými chemikáliemi, instrumentací, metodami a
postupy příprav jednotlivých vzorků používaných pro tyto studie.
Výsledky a diskuze shrnují dosažené výsledky a poznatky a jsou rozděleny na 3 části: (i)
studium modifikace hovězího sérového albuminu oxo-sloučeninami, (ii) kapilární
elektrochromatografie v otevřené kapiláře s navázanými zlatými nanočásticemi, (iii) nové
monotopické neenzymatické modifikace vzniklé reakcí albuminu s ribózou.
Anotace v angličtině
This thesis deals with the development and utilization of capillary methods (specifically
capillary electrophoresis, capillary electrochromatography and nanoliquid chromatography) to
study modifications resulting in selected proteins (specifically bovine serum albumin, human
serum albumin, human transferrin) due to the non-enzymatic glycation.
Knowledge of the non-enzymatic glycation of proteins are summarized in the theoretical
part, along with the reaction course, the resulting products and the importance of this reaction
to living organisms. It also discusses the principles of capillary electrophoresis and nanoliquid
chromatography and their applications in proteomics.
Experimental section acquainted with the chemicals used, instrumentation, methods and
procedures of preparation of the samples used for these studies.
Results and discussion summarize the results and findings and are divided snto 3 parts: (i)
the study of modifications of bovine serum albumin by oxo-compounds, (ii) capillary
electrochromatography in open tubular capillary coated with gold nanoparticles, (iii) new
monotopic non-enzymatic modification formed by the reaction of albumin with ribose.
Předseda komise seznámil přítomné se základními životopisnými daty dizertantky. Na počátku obhajoby bylo hlasováno o jejím dalším pokračování z důvodu nepřítomnosti jednoho z oponentů - všichni přítomní byli pro další pokračování. Byly přečteny posudky školitele a školícího pracoviště. Poté následoval výklad dizertační práce přednesený dizertantkou. Dále přítomný oponent prof. Glatz přečetl svůj oponentský posudek a za nepřítomnou prof. Tesařovou posudek přečetl předseda komise. Dizertantka zodpověděla dotazy a připomínky obou oponentů. Následovala rozprava k předložené práci.
Dotazy: prof. Glatz: co je kyveta s obalovým tokem
doc. Fischer: vysvětlení UV spektra zlatých nanočástic, instrumentace nano-LC
doc. Adam: využití zlatých nanočástic pro separace různých typů látek.
Žádné připomínky zvenčí nebyly doručeny. Následovala neveřejná část diskuze členů komise. Nakonec proběhlo tajné hlasování. Dizertantka byla seznámena s výsledkem obhajoby.