Diplomová práce se zabývá zavedením blotovacích technik (Dot-Blot, 1-D a 2-D Western Blot) a isoelektrické fokusace v kombinaci s následnou blotovací technikou a imunochemickou detekcí pro biomarkery Alzheimerovy choroby (AD), konkrétně A 1-42 a celkového tau proteinu. Součástí práce je optimalizace dílčích vybraných separačních a analytických metod v kombinaci s různými způsoby detekce kolorimetrie, chemiluminiscence) a porovnání citlivostí daných detekcí pro jednotlivé metody a biomarkery. Chemiluminiscence jako nejcitlivější detekce je poté použita k průkazu biomarkerů AD získaného z reálného biologického vzorku (CSF) pomocí vysoce účinné metody 2-D elektroforézy.
Anotace v angličtině
This thesis deals with implementation of blotting techniques (Dot-Blot, 1-D and 2-D Western Blot) and isoelectric focusing with blotting technique and immunochemical detection of biomarkers of Alzheimer's disease (AD), specifically A 1-42 and total tau protein. This thesis includes optimalization of procedures of each method and their combination with different detection systems (colorimetry, chemiluminescence). These detection systems are compared for each method by sensitivity. Finally the chemiluminiscence as the detection with
highest sensitivity is used for detection of biomarkers of AD separated from biologic sample (CSF) by 2-D electrophoresis.
Klíčová slova
Alzheimerova choroba; Amyloid beta; Tau protein; Dot-Blot; Western Blot; 2-D
elektroforéza
Klíčová slova v angličtině
Alzheimer's disease, Amyloid beta, Tau protein, Dot-Blot, Western Blot, 2-D electrophoresis
Rozsah průvodní práce
-
Jazyk
CZ
Anotace
Diplomová práce se zabývá zavedením blotovacích technik (Dot-Blot, 1-D a 2-D Western Blot) a isoelektrické fokusace v kombinaci s následnou blotovací technikou a imunochemickou detekcí pro biomarkery Alzheimerovy choroby (AD), konkrétně A 1-42 a celkového tau proteinu. Součástí práce je optimalizace dílčích vybraných separačních a analytických metod v kombinaci s různými způsoby detekce kolorimetrie, chemiluminiscence) a porovnání citlivostí daných detekcí pro jednotlivé metody a biomarkery. Chemiluminiscence jako nejcitlivější detekce je poté použita k průkazu biomarkerů AD získaného z reálného biologického vzorku (CSF) pomocí vysoce účinné metody 2-D elektroforézy.
Anotace v angličtině
This thesis deals with implementation of blotting techniques (Dot-Blot, 1-D and 2-D Western Blot) and isoelectric focusing with blotting technique and immunochemical detection of biomarkers of Alzheimer's disease (AD), specifically A 1-42 and total tau protein. This thesis includes optimalization of procedures of each method and their combination with different detection systems (colorimetry, chemiluminescence). These detection systems are compared for each method by sensitivity. Finally the chemiluminiscence as the detection with
highest sensitivity is used for detection of biomarkers of AD separated from biologic sample (CSF) by 2-D electrophoresis.
Klíčová slova
Alzheimerova choroba; Amyloid beta; Tau protein; Dot-Blot; Western Blot; 2-D
elektroforéza
Klíčová slova v angličtině
Alzheimer's disease, Amyloid beta, Tau protein, Dot-Blot, Western Blot, 2-D electrophoresis
Zásady pro vypracování
Cílem práce je vytipování specifických protilátek pro imunodetekci vybraných proteinových biomarkerů Alzheimerovy choroby (Abeta peptidy, Tau protein) pomocí blotovacích technik (dot-blot a western-blot), srovnání citlivosti různých detekčních technik (kolorimetrické, chemiluminiscenční) a optimalizace podmínek detekce a separace. Zoptimalizované podmínky budou nakonec použity pro detekci biomarkerů v reálném biologickém vzorku separovaném 2-D elektroforézou.
Teoretická část bude obsahovat:
1) Základní informace o patogenezi, vývoji a současném stavu časné diagnostiky Alzheimerovy choroby.
2) Popis struktury a funkce vybraných klinicky významných biomarkerů Alzheimerovy choroby.
3) Přehled separačních a analytických metod v současné době používaných pro detekci biomarkerů Alzheimerovy choroby.
4) Princip, význam a provedení metody izoelektrické fokusace, 2-D elektroforézy a imunoblotingu. Informace o využití těchto technik pro detekci biomarkerů Alzheimerovy choroby (Abeta peptidy, Tau protein a jiné).
Pro teoretickou rešerši využít nejnovější literární zdroje.
Experimentální část bude zahrnovat:
1) Zavedení blotovacích technik dot-blot a western-blot pro vybrané proteiny a peptidy, stanovení citlivosti detekce pro příslušné látky, optimalizace detekčních a separačních podmínek.
2) Zavedení metody izoelektrické fokusace a následně 2D elektroforézy s použitím vytipovaného modelového systému (směs proteinů a peptidů). Poté kombinace této techniky s blotovací technikou a imunochemickou detekcí.
3) 2-D separace a následná detekce alespoň jednoho z biomarkerů AD v reálném biologickém vzorku (CSF).
Zásady pro vypracování
Cílem práce je vytipování specifických protilátek pro imunodetekci vybraných proteinových biomarkerů Alzheimerovy choroby (Abeta peptidy, Tau protein) pomocí blotovacích technik (dot-blot a western-blot), srovnání citlivosti různých detekčních technik (kolorimetrické, chemiluminiscenční) a optimalizace podmínek detekce a separace. Zoptimalizované podmínky budou nakonec použity pro detekci biomarkerů v reálném biologickém vzorku separovaném 2-D elektroforézou.
Teoretická část bude obsahovat:
1) Základní informace o patogenezi, vývoji a současném stavu časné diagnostiky Alzheimerovy choroby.
2) Popis struktury a funkce vybraných klinicky významných biomarkerů Alzheimerovy choroby.
3) Přehled separačních a analytických metod v současné době používaných pro detekci biomarkerů Alzheimerovy choroby.
4) Princip, význam a provedení metody izoelektrické fokusace, 2-D elektroforézy a imunoblotingu. Informace o využití těchto technik pro detekci biomarkerů Alzheimerovy choroby (Abeta peptidy, Tau protein a jiné).
Pro teoretickou rešerši využít nejnovější literární zdroje.
Experimentální část bude zahrnovat:
1) Zavedení blotovacích technik dot-blot a western-blot pro vybrané proteiny a peptidy, stanovení citlivosti detekce pro příslušné látky, optimalizace detekčních a separačních podmínek.
2) Zavedení metody izoelektrické fokusace a následně 2D elektroforézy s použitím vytipovaného modelového systému (směs proteinů a peptidů). Poté kombinace této techniky s blotovací technikou a imunochemickou detekcí.
3) 2-D separace a následná detekce alespoň jednoho z biomarkerů AD v reálném biologickém vzorku (CSF).
Seznam doporučené literatury
Podle pokynů vedoucího diplomové práce.
Seznam doporučené literatury
Podle pokynů vedoucího diplomové práce.
Přílohy volně vložené
-
Přílohy vázané v práci
-
Převzato z knihovny
Ne
Plný text práce
Přílohy
Posudek(y) oponenta
Hodnocení vedoucího
Záznam průběhu obhajoby
1. Prezentace výsledků diplomové práce.
2. Přečtení posudků vedoucího a oponenta diplomové práce.
3. Diskuze k posudkům vedoucího a oponenta diplomové práce.
4. Studentka odpovídala na všechny dotazy a připomínky k DP.