Cílem této diplomové práce bylo značení protilátek enzymem modifikovanými nanočásticemi (konjugát), které jsou využitelné pro kvantitativní elektrochemickou detekci antigenu pomocí imunosenzoru založeném na ELISA principu. Imunosenzor je tvořen primárními anti-ApoE protilátkami (IgG) imobilizovanými na magnetických částicích, proteinem ApoE jako antigenem a připravenými sekundárními anti-ApoE protilátkami (IgG) značenými enzymem modifikovanými mezoporézními křemičitými nanočásticemi (MSN). Jako enzymy byly využity křenová peroxidáza (HRP) a alkalická fosfatáza (ALP). Dílčí kroky spočívaly v nalezení optimálního množství enzymů imobilizovaných na nanočástice, určení optimálního ředění připravených konjugátů, a jejich funkčnost byla nakonec ověřena sestavením kompletních imunosenzorů. Pro elektrochemickou detekci byly využity miniaturizované tištěné tříelektrodové senzory, lineární a square wave voltametrie jako detekční techniky.
Anotace v angličtině
The aim of the thesis was labeling of antibodies with enzyme modified nanoparticles (conjugate), which are used for quantitative electrochemical detection of an antigen by using immunosensor based on the ELISA principle. The immunosensor is formed by primary anti-ApoE antibodies (IgG) immobilized on magnetic particles, protein ApoE as an antigen and prepared secondary anti-ApoE antibodies (IgG) labeled with enzyme modified mesoporous silica nanoparticles (MSN). Horseradish peroxidase (HRP) and alkaline phosphatase (ALP) were used as enzymes. Substeps consisted of finding the optimum amounts of the enzymes immobilized on nanoparticles, determining of optimal dilution prepared conjugates and their functionality was finally verified by constructing complete immunosensor. For electrochemical detection were used miniaturized three-electrode printed sensors, linear and square wave voltammetry as a detection technique.
Cílem této diplomové práce bylo značení protilátek enzymem modifikovanými nanočásticemi (konjugát), které jsou využitelné pro kvantitativní elektrochemickou detekci antigenu pomocí imunosenzoru založeném na ELISA principu. Imunosenzor je tvořen primárními anti-ApoE protilátkami (IgG) imobilizovanými na magnetických částicích, proteinem ApoE jako antigenem a připravenými sekundárními anti-ApoE protilátkami (IgG) značenými enzymem modifikovanými mezoporézními křemičitými nanočásticemi (MSN). Jako enzymy byly využity křenová peroxidáza (HRP) a alkalická fosfatáza (ALP). Dílčí kroky spočívaly v nalezení optimálního množství enzymů imobilizovaných na nanočástice, určení optimálního ředění připravených konjugátů, a jejich funkčnost byla nakonec ověřena sestavením kompletních imunosenzorů. Pro elektrochemickou detekci byly využity miniaturizované tištěné tříelektrodové senzory, lineární a square wave voltametrie jako detekční techniky.
Anotace v angličtině
The aim of the thesis was labeling of antibodies with enzyme modified nanoparticles (conjugate), which are used for quantitative electrochemical detection of an antigen by using immunosensor based on the ELISA principle. The immunosensor is formed by primary anti-ApoE antibodies (IgG) immobilized on magnetic particles, protein ApoE as an antigen and prepared secondary anti-ApoE antibodies (IgG) labeled with enzyme modified mesoporous silica nanoparticles (MSN). Horseradish peroxidase (HRP) and alkaline phosphatase (ALP) were used as enzymes. Substeps consisted of finding the optimum amounts of the enzymes immobilized on nanoparticles, determining of optimal dilution prepared conjugates and their functionality was finally verified by constructing complete immunosensor. For electrochemical detection were used miniaturized three-electrode printed sensors, linear and square wave voltammetry as a detection technique.
1. Teoretická část:
a) Rešerše o enzymech používaných pro značení protilátek v ELISA metodách, zejména se zaměřením na HRP a ALP.
b) V další části se zaměřit na nanočástice a zejména jejich kombinaci s uvedenými enzymy pro značení protilátek.
c) Rešerše s praktickými příklady využití takto připravených značených protilátek v elektrochemické detekci proteinů.
2. Praktická část:
a) Příprava protilátek značených enzymy HRP a ALP, ověření elektrochemicky.
b) Funkcionalizace nanočástic těmito enzymy a jejich následná vazba na protilátky, ověření elektrochemicky.
c) Sestavení celého imunosensoru v uspořádání protilátka - antigen - protilátka značená, a to s využitím vhodného modelového systému (anti-ApoE - ApoE).
Zásady pro vypracování
1. Teoretická část:
a) Rešerše o enzymech používaných pro značení protilátek v ELISA metodách, zejména se zaměřením na HRP a ALP.
b) V další části se zaměřit na nanočástice a zejména jejich kombinaci s uvedenými enzymy pro značení protilátek.
c) Rešerše s praktickými příklady využití takto připravených značených protilátek v elektrochemické detekci proteinů.
2. Praktická část:
a) Příprava protilátek značených enzymy HRP a ALP, ověření elektrochemicky.
b) Funkcionalizace nanočástic těmito enzymy a jejich následná vazba na protilátky, ověření elektrochemicky.
c) Sestavení celého imunosensoru v uspořádání protilátka - antigen - protilátka značená, a to s využitím vhodného modelového systému (anti-ApoE - ApoE).
Seznam doporučené literatury
Podle pokynů vedoucího diplomové práce.
Seznam doporučené literatury
Podle pokynů vedoucího diplomové práce.
Přílohy volně vložené
1x CD
Přílohy vázané v práci
ilustrace, grafy, tabulky
Převzato z knihovny
Ne
Plný text práce
Přílohy
Posudek(y) oponenta
Hodnocení vedoucího
Záznam průběhu obhajoby
1. Prezentace výsledků diplomové práce.
2. Přečtení posudků vedoucího a oponenta diplomové práce. 3. Diskuze k posudkům vedoucího a oponenta diplomové práce. 4. Studentka odpovídala na všechny dotazy a připomínky k DP.