Tato diplomová práce se zabývá studiem fosforylace ovalbuminu pomocí kapilární zónové elektroforézy a hmotnostní spektrometrie. V teoretické části jsou popsány základní principy elektromigračních technik a hmotnostní spektrometrie a také struktura ovalbuminu, jeho posttranslační modifikace a význam při potravinových alergiích. Experimentální část práce se zabývá přípravou magnetických nosičů s imobilizovanými enzymy pro proteolytické štěpení a defosforylaci ovalbuminu a také přípravou vzorku ovalbuminu pro CZE separaci. Jednotlivé kroky přípravy vzorku jsou ověřovány pomocí MALDI-MS analýzy. Poslední část se věnuje optimalizaci elektroforetické separace fosfopeptidů tohoto proteinu před a po enzymové defosforylaci.
Anotace v angličtině
This thesis deals with the study of phosphorylation of ovalbumin by capillary zone electrophoresis and mass spectrometry. The theoretical part describes the basic principles of electromigration techniques and mass spectrometry as well as the structure of ovalbumin, its posttranslational modifications and importance in food allergies. The experimental part of this work is focused on ovalbumin sample preparation for CZE separation, including proteolytic cleavage and dephosphorylation of ovalbumin by enzymes immobilized on magnetic carriers. All sample preparation steps are verified by MALDI-MS analysis. Finally, the optimized separation conditions are used for CZE analysis of ovalbumin phosphopeptides before and after enzymatic dephosphorylation.
Ovalbumin, capillary zone electrophoresis, MALDI-MS, immobilization of enzymes
Rozsah průvodní práce
81
Jazyk
CZ
Anotace
Tato diplomová práce se zabývá studiem fosforylace ovalbuminu pomocí kapilární zónové elektroforézy a hmotnostní spektrometrie. V teoretické části jsou popsány základní principy elektromigračních technik a hmotnostní spektrometrie a také struktura ovalbuminu, jeho posttranslační modifikace a význam při potravinových alergiích. Experimentální část práce se zabývá přípravou magnetických nosičů s imobilizovanými enzymy pro proteolytické štěpení a defosforylaci ovalbuminu a také přípravou vzorku ovalbuminu pro CZE separaci. Jednotlivé kroky přípravy vzorku jsou ověřovány pomocí MALDI-MS analýzy. Poslední část se věnuje optimalizaci elektroforetické separace fosfopeptidů tohoto proteinu před a po enzymové defosforylaci.
Anotace v angličtině
This thesis deals with the study of phosphorylation of ovalbumin by capillary zone electrophoresis and mass spectrometry. The theoretical part describes the basic principles of electromigration techniques and mass spectrometry as well as the structure of ovalbumin, its posttranslational modifications and importance in food allergies. The experimental part of this work is focused on ovalbumin sample preparation for CZE separation, including proteolytic cleavage and dephosphorylation of ovalbumin by enzymes immobilized on magnetic carriers. All sample preparation steps are verified by MALDI-MS analysis. Finally, the optimized separation conditions are used for CZE analysis of ovalbumin phosphopeptides before and after enzymatic dephosphorylation.
Ovalbumin, capillary zone electrophoresis, MALDI-MS, immobilization of enzymes
Zásady pro vypracování
Teoretická část:
o Ovalbumin, jeho struktura, funkce a význam při potravinových alergiích.
o Posttranslační modifikace ovalbuminu.
o Princip kapilární elektroforézy (CE).
o Princip hmotnostní spektrometrie (MS).
o Využití CE a MS pro analýzu ovalbuminu.
Praktická část:
o Optimalizace proteolytického štěpení a defosforylace ovalbuminu.
o Příprava vzorku ovalbuminu pro CZE separaci a MALDI-MS analýzu.
o Studium fosforylace ovalbuminu s využitím CZE v kombinaci s enzymy imobilizovanými na magnetických nosičích.
Zásady pro vypracování
Teoretická část:
o Ovalbumin, jeho struktura, funkce a význam při potravinových alergiích.
o Posttranslační modifikace ovalbuminu.
o Princip kapilární elektroforézy (CE).
o Princip hmotnostní spektrometrie (MS).
o Využití CE a MS pro analýzu ovalbuminu.
Praktická část:
o Optimalizace proteolytického štěpení a defosforylace ovalbuminu.
o Příprava vzorku ovalbuminu pro CZE separaci a MALDI-MS analýzu.
o Studium fosforylace ovalbuminu s využitím CZE v kombinaci s enzymy imobilizovanými na magnetických nosičích.
Seznam doporučené literatury
Podle pokynů vedoucího diplomové práce.
Seznam doporučené literatury
Podle pokynů vedoucího diplomové práce.
Přílohy volně vložené
-
Přílohy vázané v práci
ilustrace, grafy, schémata, tabulky
Převzato z knihovny
Ne
Plný text práce
Přílohy
Posudek(y) oponenta
Hodnocení vedoucího
Záznam průběhu obhajoby
1. Prezentace výsledků diplomové práce.
2. Diskuze k posudku vedoucího diplomové práce.
3. Studentka zodpověděla všechny dotazy a připomínky k DP.