Práce se zabývá analýzou exprese cytochromu P450 3A4 (CYP3A4) v nádorové a nenádorové jaterní tkáni pacientů s hepatocelulárním karcinomem a exprese jeho hlavních regulátorů, nukleárních receptorů: pregnanového X receptoru (PXR) a konstitutivního androstanového receptoru (CAR). Cytochrom P450 tvoří hlavní enzymatický systém I. fáze biotransformace léčiv (a jiných xenobiotik), játra jsou primárním metabolickým a biotransformačním orgánem těla a je všeobecně známo, že nádorová transformace hepatocytů vede k vymizení jejich metabolických funkcí a celkové dysregulaci genové exprese.
Anotace v angličtině
Presented study analyzes the expression of cytochrome P450 3A4 (CYP3A4) in tumor and surrounding liver tissue in patients with hepatocellular carcinoma and its main regulators, nuclear receptors: the pregnane X receptor (PXR) and the constitutive androstan receptor (CAR). Cytochrome P450 is the main enzymatic system of the Ist phase of biotransformation of drugs (and other xenobiotics) and liver is the primary organ of biotransformation. Malign transformation of the hepatocytes leads to a significant silencing of their metabolic functions and capacity and overall dysregulation of gene expression.
Práce se zabývá analýzou exprese cytochromu P450 3A4 (CYP3A4) v nádorové a nenádorové jaterní tkáni pacientů s hepatocelulárním karcinomem a exprese jeho hlavních regulátorů, nukleárních receptorů: pregnanového X receptoru (PXR) a konstitutivního androstanového receptoru (CAR). Cytochrom P450 tvoří hlavní enzymatický systém I. fáze biotransformace léčiv (a jiných xenobiotik), játra jsou primárním metabolickým a biotransformačním orgánem těla a je všeobecně známo, že nádorová transformace hepatocytů vede k vymizení jejich metabolických funkcí a celkové dysregulaci genové exprese.
Anotace v angličtině
Presented study analyzes the expression of cytochrome P450 3A4 (CYP3A4) in tumor and surrounding liver tissue in patients with hepatocellular carcinoma and its main regulators, nuclear receptors: the pregnane X receptor (PXR) and the constitutive androstan receptor (CAR). Cytochrome P450 is the main enzymatic system of the Ist phase of biotransformation of drugs (and other xenobiotics) and liver is the primary organ of biotransformation. Malign transformation of the hepatocytes leads to a significant silencing of their metabolic functions and capacity and overall dysregulation of gene expression.
Teoretická část:
Teoretická část práce bude postavena na interdisciplinární rešerši a utřídění základních a nejnovějších poznatků a souvislostí z oblastí onkologie, farmakologie a molekulární biologie se zaměřením na hepatocelulární karcinom, metabolismus léčiv a regulaci exprese hlavních biotransformačních enzymů. Cílem této rešerše bude otevřít otázku potenciálního dopadu alterované exprese metabolických enzymů na farmakoterapii pacientů s hepatocelulárním karcinomem. Exprese cytochromů P450 (CYP), jež jsou hlavními enzymy metabolismu xenobiotik v organismu s dominantní lokalizací v jaterní tkáni, překvapivě dosud nebyla u hepatocelulárního karcinomu (jakožto hlavní primární jaterní malignity) studována. Tato práce bude zaměřena na nejvýznamnější formu - CYP3A4, která metabolizuje více než 50 % léčiv používaných v humánní medicíně, včetně např kodeinu, cyklosporinu A, diazepamu, erytromycinu a mnohých dalších antibiotik, nesteroidních antiflogistik, statinů, hormonů, protinádorových léčiv aj.
Experimentální část:
Experimentální práce bude zahrnovat zpracování vzorků nádorové a nenádorové jaterní tkáně od pacientů s hepatocelulárním karcinomem, izolaci nukleových kyselin (DNA, RNA) a proteinů, hlavní náplní bude stanovení exprese CYP3A4 a jeho hlavních regulátorů (nukleární receptory PXR /pregnanový X receptor/ a CAR /konstitutivní androstenový receptor) na úrovni mRNA, ověření výsledků na úrovni proteinu (metodou western blotting) a kontrolní analýza CNV (copy number variation) genu pro CYP3A4 metodou MLPA (multiple ligation probe assay). Výsledky budou doplněny o dostupná klinická data pacientů.
Zásady pro vypracování
Teoretická část:
Teoretická část práce bude postavena na interdisciplinární rešerši a utřídění základních a nejnovějších poznatků a souvislostí z oblastí onkologie, farmakologie a molekulární biologie se zaměřením na hepatocelulární karcinom, metabolismus léčiv a regulaci exprese hlavních biotransformačních enzymů. Cílem této rešerše bude otevřít otázku potenciálního dopadu alterované exprese metabolických enzymů na farmakoterapii pacientů s hepatocelulárním karcinomem. Exprese cytochromů P450 (CYP), jež jsou hlavními enzymy metabolismu xenobiotik v organismu s dominantní lokalizací v jaterní tkáni, překvapivě dosud nebyla u hepatocelulárního karcinomu (jakožto hlavní primární jaterní malignity) studována. Tato práce bude zaměřena na nejvýznamnější formu - CYP3A4, která metabolizuje více než 50 % léčiv používaných v humánní medicíně, včetně např kodeinu, cyklosporinu A, diazepamu, erytromycinu a mnohých dalších antibiotik, nesteroidních antiflogistik, statinů, hormonů, protinádorových léčiv aj.
Experimentální část:
Experimentální práce bude zahrnovat zpracování vzorků nádorové a nenádorové jaterní tkáně od pacientů s hepatocelulárním karcinomem, izolaci nukleových kyselin (DNA, RNA) a proteinů, hlavní náplní bude stanovení exprese CYP3A4 a jeho hlavních regulátorů (nukleární receptory PXR /pregnanový X receptor/ a CAR /konstitutivní androstenový receptor) na úrovni mRNA, ověření výsledků na úrovni proteinu (metodou western blotting) a kontrolní analýza CNV (copy number variation) genu pro CYP3A4 metodou MLPA (multiple ligation probe assay). Výsledky budou doplněny o dostupná klinická data pacientů.
Seznam doporučené literatury
Anzenbacher, P., & Zanger, U. M. (2012). Metabolism of drugs and other xenobiotics. Hoboken, N.J.: Wiley-VCH. ISBN 978-3-527-32903-8.
G Giaccone and JC Soria (Eds). (2007)Targeted Therapies in Oncology. New York: Informa Healthcare. ISBN 978-0-8493-9371-6.
původní vědecké články uveřejněné v databázích typu PubMed (NCBI) apod.
Seznam doporučené literatury
Anzenbacher, P., & Zanger, U. M. (2012). Metabolism of drugs and other xenobiotics. Hoboken, N.J.: Wiley-VCH. ISBN 978-3-527-32903-8.
G Giaccone and JC Soria (Eds). (2007)Targeted Therapies in Oncology. New York: Informa Healthcare. ISBN 978-0-8493-9371-6.
původní vědecké články uveřejněné v databázích typu PubMed (NCBI) apod.
Přílohy volně vložené
1 CD-ROM
Přílohy vázané v práci
grafy, tabulky
Převzato z knihovny
Ne
Plný text práce
Přílohy
Posudek(y) oponenta
Hodnocení vedoucího
Záznam průběhu obhajoby
Prezentace výsledků diplomové práce.
Diskuze k posudku vedoucího a oponenta diplomové práce. Studentka zodpověděla všechny dotazy a připomínky k diplomové práci.