Diplomová práce pojednává o zavedení a optimalizaci metody ELISA pro průkaz a kvantifikaci specifických anti-CAI protilátek v lidském séru. Test by měl sloužit pro vyšetření pacientů s hematoonkologickým onemocněním. Byla provedena optimalizace podmínek stanovení a tyto podmínky byly poté použity pro proměření pěti neznámých vzorků séra od pacientů s mnohočetným myelomem, kteří byli léčeni vysokodávkovým ozařováním s následnou transplantací kmenových buněk. Teoretická část shrnuje poznatky o jednotlivých druzích EIA metod, o indikátorech používaných pro imunoanalytické metody, o možnostech, jak zvýšit citlivost detekce. V závěrečné kapitole jsou zmíněny přístroje pro automatizaci imunoenzymatických metod.
Anotace v angličtině
The thesis discusses the implementation and optimization of ELISA methods for the detection and quantification of specific anti-CAI antibodies in human serum. The test should be used for the evaluation of patients with hematooncological disease. The optimization of assay conditions was performed and these conditions were then used for the measurement of five unknown serum samples of multiple myeloma patients treated by high dose irradiation with subsequent stem cell transplantation. The theoretical part summarizes information on various types of EIA methods, the indicators used for immunoassays, ways how to increase the detection sensitivity. The final chapter describes devices for automation of immunoenzymatic methods
Klíčová slova
imunoanalýza, ELISA, karbonická anhydráza I, o fenylendiamin, tetramethylbenzidin
Klíčová slova v angličtině
immunoassay, ELISA, carbonic anhydrase I, o-fenylendiamine, tetramethylbenzidin
Rozsah průvodní práce
98 s. (17 427 znaků)
Jazyk
CZ
Anotace
Diplomová práce pojednává o zavedení a optimalizaci metody ELISA pro průkaz a kvantifikaci specifických anti-CAI protilátek v lidském séru. Test by měl sloužit pro vyšetření pacientů s hematoonkologickým onemocněním. Byla provedena optimalizace podmínek stanovení a tyto podmínky byly poté použity pro proměření pěti neznámých vzorků séra od pacientů s mnohočetným myelomem, kteří byli léčeni vysokodávkovým ozařováním s následnou transplantací kmenových buněk. Teoretická část shrnuje poznatky o jednotlivých druzích EIA metod, o indikátorech používaných pro imunoanalytické metody, o možnostech, jak zvýšit citlivost detekce. V závěrečné kapitole jsou zmíněny přístroje pro automatizaci imunoenzymatických metod.
Anotace v angličtině
The thesis discusses the implementation and optimization of ELISA methods for the detection and quantification of specific anti-CAI antibodies in human serum. The test should be used for the evaluation of patients with hematooncological disease. The optimization of assay conditions was performed and these conditions were then used for the measurement of five unknown serum samples of multiple myeloma patients treated by high dose irradiation with subsequent stem cell transplantation. The theoretical part summarizes information on various types of EIA methods, the indicators used for immunoassays, ways how to increase the detection sensitivity. The final chapter describes devices for automation of immunoenzymatic methods
Klíčová slova
imunoanalýza, ELISA, karbonická anhydráza I, o fenylendiamin, tetramethylbenzidin
Klíčová slova v angličtině
immunoassay, ELISA, carbonic anhydrase I, o-fenylendiamine, tetramethylbenzidin
Zásady pro vypracování
Teoretická část:
1) Všechny typy EIA metod se zaměřením na heterogenní systém s enzymatickými indikátory.
2) Typy nosičů, které se v současné době používají nebo testují jako vhodné systémy pro heterogenní uspořádání EIA testů.
3) Typy enzymů používaných ke značení protilátek (konjugáty).
4) Techniky pro určení nebo zvýšení citlivost metody, proces stanovení reprodukovatelnosti měření, rozsahu linearity signálu apod. (všechny analytické parametry).
5) Automatizace imunochemických analýz se zaměřením na EIA v heterogenním uspořádání - využívané v klinické praxi.
6) Karbonická anhydráza I - význam, struktura, vlastnosti, výskyt v lidském organismu.
Experimentální část:
1) Zavést a rutinně provádět techniku ELISA metody pro kvantifikaci modelových anti-CHT IgG protilátek prasečího původu.
2) Optimalizovat ELISA metodu pro imunospecifický pár chymotrypsin-antichymotrypsinové polyklonální protilátky (dva různé typy chromogenů pro HRP).
3) Zavést metodu pro stanovení aviditního indexu modelových anti-chymotrypsinových protilátek.
4) Zavést metodu a provést optimalizaci ELISA testu pro průkaz a kvantifikaci anti-CA I protilátek.
Zásady pro vypracování
Teoretická část:
1) Všechny typy EIA metod se zaměřením na heterogenní systém s enzymatickými indikátory.
2) Typy nosičů, které se v současné době používají nebo testují jako vhodné systémy pro heterogenní uspořádání EIA testů.
3) Typy enzymů používaných ke značení protilátek (konjugáty).
4) Techniky pro určení nebo zvýšení citlivost metody, proces stanovení reprodukovatelnosti měření, rozsahu linearity signálu apod. (všechny analytické parametry).
5) Automatizace imunochemických analýz se zaměřením na EIA v heterogenním uspořádání - využívané v klinické praxi.
6) Karbonická anhydráza I - význam, struktura, vlastnosti, výskyt v lidském organismu.
Experimentální část:
1) Zavést a rutinně provádět techniku ELISA metody pro kvantifikaci modelových anti-CHT IgG protilátek prasečího původu.
2) Optimalizovat ELISA metodu pro imunospecifický pár chymotrypsin-antichymotrypsinové polyklonální protilátky (dva různé typy chromogenů pro HRP).
3) Zavést metodu pro stanovení aviditního indexu modelových anti-chymotrypsinových protilátek.
4) Zavést metodu a provést optimalizaci ELISA testu pro průkaz a kvantifikaci anti-CA I protilátek.
Seznam doporučené literatury
Podle pokynů školitele, elektronické databáze odborných textů.
Seznam doporučené literatury
Podle pokynů školitele, elektronické databáze odborných textů.
Přílohy volně vložené
1 CD ROM
Přílohy vázané v práci
-
Převzato z knihovny
Ne
Plný text práce
Přílohy
Posudek(y) oponenta
Hodnocení vedoucího
Záznam průběhu obhajoby
1. Prezentace výsledků diplomové práce.
2. Diskuze k posudku vedoucího diplomové práce.
3. Studentka zodpověděla všechny dotazy a připomínky k DP.