Diplomová práce se zabývá přípravou sekundárních protilátek značených kvantovými tečkami (konjugát), které jsou využitelné pro kvantitativní elektrochemickou detekci antigenu pomocí imunosenzoru založeném na principu ELISA. Imunosenzor je tvořen primárními anti-CA 125 protilátkami (IgG) imobilizovanými na magnetických částicích, proteinem CA 125 jako antigenem a připravenými sekundárními anti-CA 125 protilátkami (IgG) značenými kvantovými tečkami. Jako kvantové tečky byly použity InP/ZnS QDs. Dílčí kroky spočívaly v optimalizaci postupu přípravy magnetického nosiče (tj. imobilizace antigenu/protilátky), v optimalizaci postupu konjugace protilátek s QDs pro přípravu sekundárních značených protilátek anti-CA 125 IgGInP/ZnS a následném ověření jeho funkčnosti a sestavení kompletního imunosenzoru. Pro elektrochemickou detekci byly využity miniaturizované tištěné tříelektrodové senzory s uhlíkovou pracovní elektrodou se rtuťovým filmem a square-wave anodická rozpouštěcí voltametrie jako detekční technika.
Anotace v angličtině
The thesis deals with the preparation of secondary antibodies labeled with quantum dots (conjugate), which are used for quantitative electrochemical detection of an antigen by using immunosensor based on the ELISA. The immunosensor is formed by primary anti-CA 125 antibodies (IgG) immobilized on magnetic particles, protein CA 125 as an antigen and prepared secondary anti-CA 125 antibodies (IgG) labeled with quantum dots. InP/ZnS QDs were used as quantum dots. Substeps consisted in the optimizing procedure for the preparation of magnetic carriers (i. e. immoobilization of antigen/antibodies), in the optimizing procedure of conjugation the antibodies with quantum dots for preparation of labeled secondary antibodies anti-CA 125 IgGInP/ZnS and subsequently for verify its functionality and constructing complete immunosensor. For electrochemical detection the miniaturized three-electrode screen printed sensors with a carbon working electrode with mercury film were used. Square-wave anodic stripping voltammetry was used as a detection technique.
ovarian cancer, CA 125, magnetic particles, quantum dots, labeled antibodies, electrochemical immunosensor
Rozsah průvodní práce
140 s. (197 664)
Jazyk
CZ
Anotace
Diplomová práce se zabývá přípravou sekundárních protilátek značených kvantovými tečkami (konjugát), které jsou využitelné pro kvantitativní elektrochemickou detekci antigenu pomocí imunosenzoru založeném na principu ELISA. Imunosenzor je tvořen primárními anti-CA 125 protilátkami (IgG) imobilizovanými na magnetických částicích, proteinem CA 125 jako antigenem a připravenými sekundárními anti-CA 125 protilátkami (IgG) značenými kvantovými tečkami. Jako kvantové tečky byly použity InP/ZnS QDs. Dílčí kroky spočívaly v optimalizaci postupu přípravy magnetického nosiče (tj. imobilizace antigenu/protilátky), v optimalizaci postupu konjugace protilátek s QDs pro přípravu sekundárních značených protilátek anti-CA 125 IgGInP/ZnS a následném ověření jeho funkčnosti a sestavení kompletního imunosenzoru. Pro elektrochemickou detekci byly využity miniaturizované tištěné tříelektrodové senzory s uhlíkovou pracovní elektrodou se rtuťovým filmem a square-wave anodická rozpouštěcí voltametrie jako detekční technika.
Anotace v angličtině
The thesis deals with the preparation of secondary antibodies labeled with quantum dots (conjugate), which are used for quantitative electrochemical detection of an antigen by using immunosensor based on the ELISA. The immunosensor is formed by primary anti-CA 125 antibodies (IgG) immobilized on magnetic particles, protein CA 125 as an antigen and prepared secondary anti-CA 125 antibodies (IgG) labeled with quantum dots. InP/ZnS QDs were used as quantum dots. Substeps consisted in the optimizing procedure for the preparation of magnetic carriers (i. e. immoobilization of antigen/antibodies), in the optimizing procedure of conjugation the antibodies with quantum dots for preparation of labeled secondary antibodies anti-CA 125 IgGInP/ZnS and subsequently for verify its functionality and constructing complete immunosensor. For electrochemical detection the miniaturized three-electrode screen printed sensors with a carbon working electrode with mercury film were used. Square-wave anodic stripping voltammetry was used as a detection technique.
ovarian cancer, CA 125, magnetic particles, quantum dots, labeled antibodies, electrochemical immunosensor
Zásady pro vypracování
Teoretická část:
Z dostupné literatury vypracovat rešerši o roli biomarkeru CA125 v diagnostice ovariálního karcinomu. Popsat strukturu, funkci, běžné metody stanovení v klinické laboratorní diagnostice. Popsat princip elektrochemických imunosenzorů a zmínit konkrétní příklady využití těchto metod ve stanovení biomarkeru CA125.
Experimentální část:
1. Optimalizace dílčích kroků přípravy sendvičového imunosenzoru (tj. monoklonální nebo polyklonální protilátky imobilizované na magnetických částicích) a konjugátu (tj. monoklonální nebo polyklonální protilátky značené kvantovými tečkami) pro kvantifikaci antigenu.
2. Pro charakterizaci připravených imunosorbentů a konjugátů využít metod SDS-PAGE, dot-blot, imunoprecipitace apod.
3. Určit optimální ředění připraveného konjugátu pro daný systém.
4. Otestování finálního imunosenzoru elektrochemicky s využitím tištěných tříelektrodových senzorů a metody SWASV.
Zásady pro vypracování
Teoretická část:
Z dostupné literatury vypracovat rešerši o roli biomarkeru CA125 v diagnostice ovariálního karcinomu. Popsat strukturu, funkci, běžné metody stanovení v klinické laboratorní diagnostice. Popsat princip elektrochemických imunosenzorů a zmínit konkrétní příklady využití těchto metod ve stanovení biomarkeru CA125.
Experimentální část:
1. Optimalizace dílčích kroků přípravy sendvičového imunosenzoru (tj. monoklonální nebo polyklonální protilátky imobilizované na magnetických částicích) a konjugátu (tj. monoklonální nebo polyklonální protilátky značené kvantovými tečkami) pro kvantifikaci antigenu.
2. Pro charakterizaci připravených imunosorbentů a konjugátů využít metod SDS-PAGE, dot-blot, imunoprecipitace apod.
3. Určit optimální ředění připraveného konjugátu pro daný systém.
4. Otestování finálního imunosenzoru elektrochemicky s využitím tištěných tříelektrodových senzorů a metody SWASV.
Seznam doporučené literatury
Podle pokynů vedoucího diplomové práce.
Seznam doporučené literatury
Podle pokynů vedoucího diplomové práce.
Přílohy volně vložené
-
Přílohy vázané v práci
ilustrace, tabulky
Převzato z knihovny
Ne
Plný text práce
Přílohy
Posudek(y) oponenta
Hodnocení vedoucího
Záznam průběhu obhajoby
1. Prezentace výsledků diplomové práce.
2. Diskuze k posudku vedoucího a oponenta diplomové práce. 3. Studentka zodpověděla všechny dotazy a připomínky k DP.