Diplomová práce se zabývá vývojem lektinového nosiče pro izolaci sérových IgG ve vsádkovém a mikrofluidním uspořádání. Pro tento účel byla zvolena metoda lektinové afinitní chromatografie. Jelikož je při této metodě jako pevná fáze využíván povrch superparamagnetických částic, byl nejprve optimalizován postup přípravy magnetického nosiče (tj. imobilizace konkanavalinu A). Dále byl optimalizován postup samotné izolace IgG ze séra pomocí nosiče s imobilizovaným konkanavalinem A, nejprve ve vsádkovém uspořádání a poté i mikrofluidním uspořádání, kde byly prováděny další úpravy.
Anotace v angličtině
This thesis deals with development of lectin carrier for isolation of serum IgG in batch and microfluidic arrangement. For this purpose, the lectin affinity chromatography method has been selected. Since the surface of the superparamagnetic particles is being used as the solid phase in this method, the process of magnetic carrier preparation (i.e., the immobilization of concanavalin A) was optimized first. Furthermore, the procedure of serum IgG isolation alone has been optimized by means of a carrier with immobilized concanavalin A, first in the batch arrangement and subsequently the microfluidic arrangement where further adjustments were made.
Diplomová práce se zabývá vývojem lektinového nosiče pro izolaci sérových IgG ve vsádkovém a mikrofluidním uspořádání. Pro tento účel byla zvolena metoda lektinové afinitní chromatografie. Jelikož je při této metodě jako pevná fáze využíván povrch superparamagnetických částic, byl nejprve optimalizován postup přípravy magnetického nosiče (tj. imobilizace konkanavalinu A). Dále byl optimalizován postup samotné izolace IgG ze séra pomocí nosiče s imobilizovaným konkanavalinem A, nejprve ve vsádkovém uspořádání a poté i mikrofluidním uspořádání, kde byly prováděny další úpravy.
Anotace v angličtině
This thesis deals with development of lectin carrier for isolation of serum IgG in batch and microfluidic arrangement. For this purpose, the lectin affinity chromatography method has been selected. Since the surface of the superparamagnetic particles is being used as the solid phase in this method, the process of magnetic carrier preparation (i.e., the immobilization of concanavalin A) was optimized first. Furthermore, the procedure of serum IgG isolation alone has been optimized by means of a carrier with immobilized concanavalin A, first in the batch arrangement and subsequently the microfluidic arrangement where further adjustments were made.
Teoretická část
1. Princip bioafinitní chromatografie - princip, její provedení (kolonové, vsádkové, zaměřit se na mikrofluidní aplikace) a oblasti použití ve výzkumu, v biotechnologiích
2. Lektiny význam, funkce, struktura
3. Lektinová chromatografie a využití lektinů pro aplikace in vitro
4. Glykosylace proteinů v eukaryotních buňkách za fyziologických podmínek (fce, význam)
5. Změny ve struktuře oligosacharidových motivů u nádorových onemocnění (se zaměřením na karcinom ovaria) - příklady, vztah glykosylace k prognóze a predikci onemocnění, rezistence na terapii.
6. WOS, PubMed, Scholar, Science direct - čerpat z cizojazyčných odborných článků a monografií.
Experimentální část - přehled metod
Vazba vybraných ligandů na magnetické částice s využitím metod kovalentní vazby
Metody ověření účinnosti vazby ligandu na magnetické částice
Optimalizace podmínek interakce analytu - glykoproteinů s lektinovými ligandy - práce s modelovými biospecifickými páry
Podmínky eluce izolovaných glykoproteinů vhodné pro následné MS analýzy
Podmínky integrace lektinového nosiče do mikrofluidního systému
Afinitní izolace vybraných glykoproteinů v mikrofl. systému a porovnání se vsádkovým systémem
Zásady pro vypracování
Teoretická část
1. Princip bioafinitní chromatografie - princip, její provedení (kolonové, vsádkové, zaměřit se na mikrofluidní aplikace) a oblasti použití ve výzkumu, v biotechnologiích
2. Lektiny význam, funkce, struktura
3. Lektinová chromatografie a využití lektinů pro aplikace in vitro
4. Glykosylace proteinů v eukaryotních buňkách za fyziologických podmínek (fce, význam)
5. Změny ve struktuře oligosacharidových motivů u nádorových onemocnění (se zaměřením na karcinom ovaria) - příklady, vztah glykosylace k prognóze a predikci onemocnění, rezistence na terapii.
6. WOS, PubMed, Scholar, Science direct - čerpat z cizojazyčných odborných článků a monografií.
Experimentální část - přehled metod
Vazba vybraných ligandů na magnetické částice s využitím metod kovalentní vazby
Metody ověření účinnosti vazby ligandu na magnetické částice
Optimalizace podmínek interakce analytu - glykoproteinů s lektinovými ligandy - práce s modelovými biospecifickými páry
Podmínky eluce izolovaných glykoproteinů vhodné pro následné MS analýzy
Podmínky integrace lektinového nosiče do mikrofluidního systému
Afinitní izolace vybraných glykoproteinů v mikrofl. systému a porovnání se vsádkovým systémem
Seznam doporučené literatury
Podle pokynů vedoucího diplomové práce.
Seznam doporučené literatury
Podle pokynů vedoucího diplomové práce.
Přílohy volně vložené
-
Přílohy vázané v práci
-
Převzato z knihovny
Ne
Plný text práce
Přílohy
Posudek(y) oponenta
Hodnocení vedoucího
Záznam průběhu obhajoby
1) Prezentace výsledků diplomové práce. 2) Diskuze k posudku vedoucího a oponenta diplomové práce. 3) Studentka zodpověděla všechny dotazy a připomínky k DP.