Práce se zabývá srovnáním exprese proteinů v bakteriálních expresních systémech oproti expresi v kvasinkových expresních systémech. Velká část práce je věnována představení nejvýznamnějších kvasinkových druhů využívaných jako expresní systémy a také vektorům, které se v těchto druzích pro expresi používají.
Cíle práce jsou zaměřeny na produkci ameloblastinu divokého typu v expresním systému E. coli a jeho následná purifikace. Dále na vytvoření vektoru pro kvasinkový expresní systém, který by obsahoval gen pro ameloblastin divokého typu a jeho další dva mutanty, a to konkrétně ameloblastin delta 5, který postrádá úsek kódovaný exonem 5 a ameloblastin c-terminální část, který kóduje daný protein od 197 do 421 aminokyseliny.
Anotace v angličtině
The thesis deals with the comparation of protein expression in bacterial expression systems agains expression in yeast expression systems. A big part of the thesis is devoted to introduction of the most important yeast species, which are used as expression systems and also to vectors which are used in these expression systems.
The aims of thesis are focused on the production of ameloblastin wild type in E. coli as expression system and subsequent purification. Futher, to create a vector for yeast expression system, which contains the gene for ameloblastin wild type a others two mutatnts, namely ameloblastin delta 5, which lacks segment encoded by the exon 5 and ameloblastin c-terminal part, which encode the protein form the aminoacid 197 to 421.
Klíčová slova
Bakteriální expresní systémy, kvasinkové expresní systémy, S. cerevisiae, K. lactis, P. pastoris, purifikace proteinů, ameloblastin, In-Fusion cloning.
Klíčová slova v angličtině
The bacterial yeast expression systems, the yeast expression systems S. cerevisiae, K. lactis, P. pastoris, protein purification, ameloblastin, In-Fusion cloning.
Rozsah průvodní práce
81 s. (110 963 znaků)
Jazyk
CZ
Anotace
Práce se zabývá srovnáním exprese proteinů v bakteriálních expresních systémech oproti expresi v kvasinkových expresních systémech. Velká část práce je věnována představení nejvýznamnějších kvasinkových druhů využívaných jako expresní systémy a také vektorům, které se v těchto druzích pro expresi používají.
Cíle práce jsou zaměřeny na produkci ameloblastinu divokého typu v expresním systému E. coli a jeho následná purifikace. Dále na vytvoření vektoru pro kvasinkový expresní systém, který by obsahoval gen pro ameloblastin divokého typu a jeho další dva mutanty, a to konkrétně ameloblastin delta 5, který postrádá úsek kódovaný exonem 5 a ameloblastin c-terminální část, který kóduje daný protein od 197 do 421 aminokyseliny.
Anotace v angličtině
The thesis deals with the comparation of protein expression in bacterial expression systems agains expression in yeast expression systems. A big part of the thesis is devoted to introduction of the most important yeast species, which are used as expression systems and also to vectors which are used in these expression systems.
The aims of thesis are focused on the production of ameloblastin wild type in E. coli as expression system and subsequent purification. Futher, to create a vector for yeast expression system, which contains the gene for ameloblastin wild type a others two mutatnts, namely ameloblastin delta 5, which lacks segment encoded by the exon 5 and ameloblastin c-terminal part, which encode the protein form the aminoacid 197 to 421.
Klíčová slova
Bakteriální expresní systémy, kvasinkové expresní systémy, S. cerevisiae, K. lactis, P. pastoris, purifikace proteinů, ameloblastin, In-Fusion cloning.
Klíčová slova v angličtině
The bacterial yeast expression systems, the yeast expression systems S. cerevisiae, K. lactis, P. pastoris, protein purification, ameloblastin, In-Fusion cloning.
Zásady pro vypracování
Teoretická část bude obsahovat rešerši na téma (i) příprava rekombinantních proteinů v bakteriálním a kvasinkovém expresním systému; (ii) role ameloblastinu při tvorbě zubní skloviny; (iii) strukturní vlastnosti ameloblastinu.
Experimentální část - přehled metod a dílčích kroků:
1. Amplifikace genu kódujícího ameloblastin
2. Pokus o konstrukci vektoru pro expresi ameloblastinu v Saccharomyces cerevisiae.
3. Exprese ameloblastinu v Escherichia coli, případně v S. cerevisiae a následná purifikace.
Zásady pro vypracování
Teoretická část bude obsahovat rešerši na téma (i) příprava rekombinantních proteinů v bakteriálním a kvasinkovém expresním systému; (ii) role ameloblastinu při tvorbě zubní skloviny; (iii) strukturní vlastnosti ameloblastinu.
Experimentální část - přehled metod a dílčích kroků:
1. Amplifikace genu kódujícího ameloblastin
2. Pokus o konstrukci vektoru pro expresi ameloblastinu v Saccharomyces cerevisiae.
3. Exprese ameloblastinu v Escherichia coli, případně v S. cerevisiae a následná purifikace.
Seznam doporučené literatury
Wald, Osickova, Sulc et al. (2013) Intrinsically disordered enamel matrix protein ameloblastin forms ribbon-like supramoleular structures via N-terminal segment encoded by exon 5. J. Biol. Chem 288, 22333-22354.
Khow a Suntrarachun (2012) Strategies for production of active eukaryotic proteins in bacterial expression system. Asian Pac.J.Trop.Biomed 2, 159-162.
Porro, Gasser, Fossati et al. (2011) Production of recombinant proteins and metabolites in yeasts. Appl. Microbiol. Biotechnol. 89, 939-948.
Ruml (1997) Laboratoře z genového inženýrství. VŠCHT Praha.
Kromě těchto základních prací vyhledejte další relevantní články pomocí standardních databází.
Seznam doporučené literatury
Wald, Osickova, Sulc et al. (2013) Intrinsically disordered enamel matrix protein ameloblastin forms ribbon-like supramoleular structures via N-terminal segment encoded by exon 5. J. Biol. Chem 288, 22333-22354.
Khow a Suntrarachun (2012) Strategies for production of active eukaryotic proteins in bacterial expression system. Asian Pac.J.Trop.Biomed 2, 159-162.
Porro, Gasser, Fossati et al. (2011) Production of recombinant proteins and metabolites in yeasts. Appl. Microbiol. Biotechnol. 89, 939-948.
Ruml (1997) Laboratoře z genového inženýrství. VŠCHT Praha.
Kromě těchto základních prací vyhledejte další relevantní články pomocí standardních databází.
Přílohy volně vložené
-
Přílohy vázané v práci
ilustrace, schémata, tabulky
Převzato z knihovny
Ne
Plný text práce
Přílohy
Posudek(y) oponenta
Hodnocení vedoucího
Záznam průběhu obhajoby
1) Prezentace výsledků diplomové práce. 2) Diskuze k posudku vedoucího a oponenta diplomové práce. 3) Student zodpověděl všechny dotazy a připomínky k DP.