V této diplomové práci je optimalizováno kvantitativní stanovení kyseliny hyaluronové ve farmaceutických výrobcích pomocí kapalinové chromatografie ve spojení s hmotnostní spektrometrií či fluorescenční detekcí. Jsou podrobně popsány hyaluronidázy, jejich typy a mechanismus štěpení. Fragmentace byla provedena enzymem bakteriální hyaluronanlyáza a účinnost ověřena spektrofotometricky. Práce se zaměřuje na derivatizaci hyaluronanových fragmentů pomocí 2-aminoakridonu a jejich následnou chromatografickou separaci v systémech s obrácenými fázemi. V práci jsou uvedeny další chromatografické, elektroforetické a spektrální metody ke stanovení hyaluronanu. Zahrnuto je i aktuální využití, výroba a unikátní vlastnosti této látky.
Anotace v angličtině
In this thesis, the quantification of hyaluronic acid in pharmaceutical formulations using liquid chromatography with mass spectrometry or fluorescent detection is optimized. Different types and cleavage mechanism of the hyaluronidases is described. The fragmentation was performed by the bacterial hyaluronan lyase and cleavage was confirmed with spectrophotometry. The thesis is focused on derivatization techniques of hyaluronan fragments with 2-aminoacridone followed by reversed phase chromatography. The spectral, chromatographic and electrophoretic methods developed for hyaluronan determination are introduced. Also current applications, production and unique characteristics of this substance are included.
V této diplomové práci je optimalizováno kvantitativní stanovení kyseliny hyaluronové ve farmaceutických výrobcích pomocí kapalinové chromatografie ve spojení s hmotnostní spektrometrií či fluorescenční detekcí. Jsou podrobně popsány hyaluronidázy, jejich typy a mechanismus štěpení. Fragmentace byla provedena enzymem bakteriální hyaluronanlyáza a účinnost ověřena spektrofotometricky. Práce se zaměřuje na derivatizaci hyaluronanových fragmentů pomocí 2-aminoakridonu a jejich následnou chromatografickou separaci v systémech s obrácenými fázemi. V práci jsou uvedeny další chromatografické, elektroforetické a spektrální metody ke stanovení hyaluronanu. Zahrnuto je i aktuální využití, výroba a unikátní vlastnosti této látky.
Anotace v angličtině
In this thesis, the quantification of hyaluronic acid in pharmaceutical formulations using liquid chromatography with mass spectrometry or fluorescent detection is optimized. Different types and cleavage mechanism of the hyaluronidases is described. The fragmentation was performed by the bacterial hyaluronan lyase and cleavage was confirmed with spectrophotometry. The thesis is focused on derivatization techniques of hyaluronan fragments with 2-aminoacridone followed by reversed phase chromatography. The spectral, chromatographic and electrophoretic methods developed for hyaluronan determination are introduced. Also current applications, production and unique characteristics of this substance are included.
1. Vypracujte literární rešerši se zaměřením na využití kyseliny hyaluronové a její stanovení pomocí moderních analytických technik. Zaměřte se na úpravu vzorku před analýzou pomocí různých typů extrakcí, dále se zaměřte na enzymy vhodné pro naštěpení kyseliny hyaluronové a na vhodná derivatizační činidla pro fluorimetrickou či hmotnostně spektrometrickou detekci.
2. Na základě literární rešerše zvolte vhodné podmínky pro naštěpení kyseliny hyaluronové, derivatizaci získaných fragmentů a jejich následnou chromatografickou separaci.
3. Kvalitu naštěpení různými enzymy ověřte pomocí gelové elektroforézy a pomocí spektrofotometrického stanovení. Získané fragmenty derivatizujte vhodným činidlem a separujte s využitím kapalinové chromatografie.
4. Výsledky porovnejte a kriticky zhodnoťte.
Zásady pro vypracování
1. Vypracujte literární rešerši se zaměřením na využití kyseliny hyaluronové a její stanovení pomocí moderních analytických technik. Zaměřte se na úpravu vzorku před analýzou pomocí různých typů extrakcí, dále se zaměřte na enzymy vhodné pro naštěpení kyseliny hyaluronové a na vhodná derivatizační činidla pro fluorimetrickou či hmotnostně spektrometrickou detekci.
2. Na základě literární rešerše zvolte vhodné podmínky pro naštěpení kyseliny hyaluronové, derivatizaci získaných fragmentů a jejich následnou chromatografickou separaci.
3. Kvalitu naštěpení různými enzymy ověřte pomocí gelové elektroforézy a pomocí spektrofotometrického stanovení. Získané fragmenty derivatizujte vhodným činidlem a separujte s využitím kapalinové chromatografie.
4. Výsledky porovnejte a kriticky zhodnoťte.
Seznam doporučené literatury
Podle pokynů vedoucí práce.
Seznam doporučené literatury
Podle pokynů vedoucí práce.
Přílohy volně vložené
-
Přílohy vázané v práci
-
Převzato z knihovny
Ne
Plný text práce
Přílohy
Posudek(y) oponenta
Hodnocení vedoucího
Záznam průběhu obhajoby
Studentka úspěšně obhájila diplomovou práci a zodpověděla otázky komise.