Práce se zabývá studiem vztahu buněčné viability a koncentrace glutathionu po působení toxinů s různým mechanismem účinku. U buněčných linií A549 a Jurkat byl studován účinek CDDP, DEM, DMSO a tBHP. Ke studii byl využit WST-1 test pro sledování životaschopnosti buněk po expozici toxinům. Hladina intracelulárního glutathionu byla stanovena pomocí fluorescenční sondy monochlorobiman s fluorometrickou detekcí. Buněčné linie A549 a Jurkat byly inkubovány 1, 3, 6, 18, 21 a 24 hodin s vybranými toxiny o různé koncentraci. Bylo zjištěno, že u buněčné linie Jurkat dochází k poklesu viability před poklesem koncentrace intracelulárního glutathionu po expozici DMSO a tBHP. U působení toxinu DEM na buňky Jurkat a ovlivnění buněk A549 všemi vybranými toxiny předchází pokles GSH poklesu buněčné viability. Z celkových výsledků vyplývá, že buněčná linie A549 je k působení námi vybraných toxických látek méně citlivá než buněčná linie Jurkat.
Anotace v angličtině
The thesis deals with studying cell viability and glutathione concentration after treatments with toxins of different mechanism of action. CDDP, DEM, DMSO a tBHP treatments were studied on A549 and Jurkat cell lines. The WST-1 test was used for monitoring cell viability after toxin exposure in this study. A level of intracellular glutathione was determined by a fluorescence probe monochlorobimane followed by fluorometric detection. The A549 and Jurkat cell lines were incubated for 1, 3, 6, 18, 21 and 24 hours with selected toxins at various concentrations. We found that a decrease of cell viability is preceded by depletion of intracellular glutathione after exposure to DMSO and tBHP in Jurkat cells. The reduction of GSH levels is preceded by reduction of cell viability after exposition of DEM to Jurkat cells and after treatment of A549 cells with all selected toxins. In conclusion, the A549 cells are less sensitive to the acting of selected toxins than the Jurkat cells
Práce se zabývá studiem vztahu buněčné viability a koncentrace glutathionu po působení toxinů s různým mechanismem účinku. U buněčných linií A549 a Jurkat byl studován účinek CDDP, DEM, DMSO a tBHP. Ke studii byl využit WST-1 test pro sledování životaschopnosti buněk po expozici toxinům. Hladina intracelulárního glutathionu byla stanovena pomocí fluorescenční sondy monochlorobiman s fluorometrickou detekcí. Buněčné linie A549 a Jurkat byly inkubovány 1, 3, 6, 18, 21 a 24 hodin s vybranými toxiny o různé koncentraci. Bylo zjištěno, že u buněčné linie Jurkat dochází k poklesu viability před poklesem koncentrace intracelulárního glutathionu po expozici DMSO a tBHP. U působení toxinu DEM na buňky Jurkat a ovlivnění buněk A549 všemi vybranými toxiny předchází pokles GSH poklesu buněčné viability. Z celkových výsledků vyplývá, že buněčná linie A549 je k působení námi vybraných toxických látek méně citlivá než buněčná linie Jurkat.
Anotace v angličtině
The thesis deals with studying cell viability and glutathione concentration after treatments with toxins of different mechanism of action. CDDP, DEM, DMSO a tBHP treatments were studied on A549 and Jurkat cell lines. The WST-1 test was used for monitoring cell viability after toxin exposure in this study. A level of intracellular glutathione was determined by a fluorescence probe monochlorobimane followed by fluorometric detection. The A549 and Jurkat cell lines were incubated for 1, 3, 6, 18, 21 and 24 hours with selected toxins at various concentrations. We found that a decrease of cell viability is preceded by depletion of intracellular glutathione after exposure to DMSO and tBHP in Jurkat cells. The reduction of GSH levels is preceded by reduction of cell viability after exposition of DEM to Jurkat cells and after treatment of A549 cells with all selected toxins. In conclusion, the A549 cells are less sensitive to the acting of selected toxins than the Jurkat cells
1) Zpracujte literární rešerši zaměřenou na hodnocení cytotoxicity in vitro se zaměřením na uvedení přehledu viabilitních testů, jejich principů, hodnocení specifity a senzitivity či frekvenci jejich využití. V rámci teoretické části se detailně zaměřte na popis změn buněčné viability ve vztahu ke změnám koncentrace glutathionu, jako hlavního nitrobuněčného antioxidantu. Vztah viability a glutathionu se následně pokuste popsat nap příkladech působení několika modelových toxických látek, včetně cisplatiny, tBHP, diethylmaleátu, či dalších. Ke zpracování tohoto literárního přehledu využijte elektronické databáze (ScienceDirect, NCBI Pubmed, Web of Science).
2) V rámci praktické části:
využijte práci s buněčnými liniemi (např. buňky Jurkat, A549) k optimalizaci stanovení buněčné viability a koncentrace glutathionu;
zavedené metody využijte k charakterizaci vztahu buněčné viability a glutathionové deplece při studiu cytotoxicity u cisPt, diethylmaleátu, Cd, či tBHP.
3) Získaná experimentální data zpracujte a diskutujte. Výsledky práce následně porovnejte s výstupy jiných autorů.
Zásady pro vypracování
1) Zpracujte literární rešerši zaměřenou na hodnocení cytotoxicity in vitro se zaměřením na uvedení přehledu viabilitních testů, jejich principů, hodnocení specifity a senzitivity či frekvenci jejich využití. V rámci teoretické části se detailně zaměřte na popis změn buněčné viability ve vztahu ke změnám koncentrace glutathionu, jako hlavního nitrobuněčného antioxidantu. Vztah viability a glutathionu se následně pokuste popsat nap příkladech působení několika modelových toxických látek, včetně cisplatiny, tBHP, diethylmaleátu, či dalších. Ke zpracování tohoto literárního přehledu využijte elektronické databáze (ScienceDirect, NCBI Pubmed, Web of Science).
2) V rámci praktické části:
využijte práci s buněčnými liniemi (např. buňky Jurkat, A549) k optimalizaci stanovení buněčné viability a koncentrace glutathionu;
zavedené metody využijte k charakterizaci vztahu buněčné viability a glutathionové deplece při studiu cytotoxicity u cisPt, diethylmaleátu, Cd, či tBHP.
3) Získaná experimentální data zpracujte a diskutujte. Výsledky práce následně porovnejte s výstupy jiných autorů.
Seznam doporučené literatury
-
Seznam doporučené literatury
-
Přílohy volně vložené
1 CD
Přílohy vázané v práci
ilustrace, grafy, tabulky
Převzato z knihovny
Ne
Plný text práce
Přílohy
Posudek(y) oponenta
Hodnocení vedoucího
Záznam průběhu obhajoby
1. Prezentace výsledků diplomové práce.
2. Diskuze k posudku vedoucího a oponenta diplomové práce.
3. Studentka zodpověděla všechny dotazy a připomínky k diplomové práci.