Tato diplomová práce se zaměřuje na optimalizaci podmínek imunomagnetické
separace pro záchyt kalretikulinu ve vzorcích plodové vody. Kalretikulin je biomarkerasociovaný s rizikem vzniku intrauterinního zánětu, který může způsobit předčasný odtok plodové vody a následně předčasný porod. Úkolem diplomové práce bylo připravit imunosorbent na bázi superparamagnetických mikročástic, na které se budou kovalentně vázat molekuly IgG a specifického anti-CLR. Tento imunosorbent byl poté použit pro záchyt proteinu kalretikulinu, biomarkeru zánětu, v plodové vodě. Tímto byla ověřena kvalita imunosorbentu, jenž bude součástí senzoru pro simultánní analýzu biomarkerů zánětu v plodové vodě.
Anotace v angličtině
This diploma thesis focuses on the optimization of immunomagnetic separation
conditions for the capture of calreticulin in amniotic fluid samples. Calreticulin is a biomarker associated with the risk of intrauterine inflammation, which can cause premature amniotic fluid outflow and subsequent preterm labor. The task of the diploma thesis was to prepare an immunosorbent based on superparamagnetic microparticles, to which IgG molecules and specific anti-CLR will covalently bind. This immunosorbent was then used to capture calreticulin protein, a biomarker of inflammation, in amniotic fluid. This verified the quality of the immunosorbent, which will be part of the sensor for simultaneous analysis of inflammatory biomarkers in amniotic fluid.
Tato diplomová práce se zaměřuje na optimalizaci podmínek imunomagnetické
separace pro záchyt kalretikulinu ve vzorcích plodové vody. Kalretikulin je biomarkerasociovaný s rizikem vzniku intrauterinního zánětu, který může způsobit předčasný odtok plodové vody a následně předčasný porod. Úkolem diplomové práce bylo připravit imunosorbent na bázi superparamagnetických mikročástic, na které se budou kovalentně vázat molekuly IgG a specifického anti-CLR. Tento imunosorbent byl poté použit pro záchyt proteinu kalretikulinu, biomarkeru zánětu, v plodové vodě. Tímto byla ověřena kvalita imunosorbentu, jenž bude součástí senzoru pro simultánní analýzu biomarkerů zánětu v plodové vodě.
Anotace v angličtině
This diploma thesis focuses on the optimization of immunomagnetic separation
conditions for the capture of calreticulin in amniotic fluid samples. Calreticulin is a biomarker associated with the risk of intrauterine inflammation, which can cause premature amniotic fluid outflow and subsequent preterm labor. The task of the diploma thesis was to prepare an immunosorbent based on superparamagnetic microparticles, to which IgG molecules and specific anti-CLR will covalently bind. This immunosorbent was then used to capture calreticulin protein, a biomarker of inflammation, in amniotic fluid. This verified the quality of the immunosorbent, which will be part of the sensor for simultaneous analysis of inflammatory biomarkers in amniotic fluid.
Teoretická část:
1) popis komplikací v případě předčasného odtoku plodové vody u těhotných, zaměřit se na rizika vzniku zánětu vedoucího v některých případech k sepsi a/nebo předčasnému porodu
2) přehled významných biomarkerů zánětu, jejichž hladina v plodové vodě může stoupat (klesat) a mohou se tak stát indikátory počínajícího zánětu s důrazem na kalretikulin. Popis rozvoje infekčního zánětu a jaké složky imunitního systému se do tohoto procesu zapojují.
3) popis principu imunomagnetické separace - princip biofunkcionalizace magnetických částic ze zaměřením na různé způsoby vazby ligandů, tj. IgG molekul, na pevnou fázi. Popis možností, jak vázat IgG kovalentní vazbou, porovnání výhod a nevýhod těchto postupů, skladování a stabilita imunosorbentů. Popis podmínek, za kterých probíhá izolace cílových struktur pomocí těchto imunosorbentů.
Experimentální část:
1) Vytipování nejvhodnějších specifických protilátek pro přípravu imunosorbentu - základní metody pro charakterizaci proteinů - stanovení molekulové hmotnosti, ověření čistoty - elektroforetická separace proteinů (SDS-PAGE), blotovací techniky (western-blot, dot-blot) pro ověření reaktivity specifických antigenů a protilátek - vytipování reaktivního páru antigen - protilátka
2) příprava imunosorbentů - imobilizace IgG protilátek na magnetické částice s -COOH sk., hydrazidové sk., pomocí proteinu A/G. Vytipování vhodného způsobu imobilizace specifických anti-CALR protilátek. Ověření účinnosti imobilizace pomocí SDS-PAGE, denzitometrické vyhodnocení. Porovnání účinnosti jednotlivých způsobů vazby a testovaných magnetických nosičů.
3) ověření reaktivity připravených nosičů s cílovým antigenem - účinnost záchytu a eluce antigenu - ověření metodou SDS-PAGE či dot-blot.
4) pro nejúčinnější imunosorbent ověřit schopnost záchytu (specifitu a selektivitu) v komplexní biologické matrici - plodová voda.
Zásady pro vypracování
Teoretická část:
1) popis komplikací v případě předčasného odtoku plodové vody u těhotných, zaměřit se na rizika vzniku zánětu vedoucího v některých případech k sepsi a/nebo předčasnému porodu
2) přehled významných biomarkerů zánětu, jejichž hladina v plodové vodě může stoupat (klesat) a mohou se tak stát indikátory počínajícího zánětu s důrazem na kalretikulin. Popis rozvoje infekčního zánětu a jaké složky imunitního systému se do tohoto procesu zapojují.
3) popis principu imunomagnetické separace - princip biofunkcionalizace magnetických částic ze zaměřením na různé způsoby vazby ligandů, tj. IgG molekul, na pevnou fázi. Popis možností, jak vázat IgG kovalentní vazbou, porovnání výhod a nevýhod těchto postupů, skladování a stabilita imunosorbentů. Popis podmínek, za kterých probíhá izolace cílových struktur pomocí těchto imunosorbentů.
Experimentální část:
1) Vytipování nejvhodnějších specifických protilátek pro přípravu imunosorbentu - základní metody pro charakterizaci proteinů - stanovení molekulové hmotnosti, ověření čistoty - elektroforetická separace proteinů (SDS-PAGE), blotovací techniky (western-blot, dot-blot) pro ověření reaktivity specifických antigenů a protilátek - vytipování reaktivního páru antigen - protilátka
2) příprava imunosorbentů - imobilizace IgG protilátek na magnetické částice s -COOH sk., hydrazidové sk., pomocí proteinu A/G. Vytipování vhodného způsobu imobilizace specifických anti-CALR protilátek. Ověření účinnosti imobilizace pomocí SDS-PAGE, denzitometrické vyhodnocení. Porovnání účinnosti jednotlivých způsobů vazby a testovaných magnetických nosičů.
3) ověření reaktivity připravených nosičů s cílovým antigenem - účinnost záchytu a eluce antigenu - ověření metodou SDS-PAGE či dot-blot.
4) pro nejúčinnější imunosorbent ověřit schopnost záchytu (specifitu a selektivitu) v komplexní biologické matrici - plodová voda.
Seznam doporučené literatury
Recentní literatura dostupná v databázi WoS, MEDLINE, Sciencedirect; odborné knihy. Další dle pokynů vedoucí diplomové práce.
Seznam doporučené literatury
Recentní literatura dostupná v databázi WoS, MEDLINE, Sciencedirect; odborné knihy. Další dle pokynů vedoucí diplomové práce.
Přílohy volně vložené
-
Přílohy vázané v práci
-
Převzato z knihovny
Ne
Plný text práce
Přílohy
Posudek(y) oponenta
Hodnocení vedoucího
Záznam průběhu obhajoby
1. Prezentace výsledků diplomové práce.
2. Diskuze k posudkům vedoucího a oponenta diplomové práce.
3. Student/ka zodpověděl/a všechny dotazy a připomínky k DP.