- All mandatory fields for this Thesis are filled in.
Main topic
Zavedení metody pro průkaz a kvantifikaci specifických anti-ENOL protilátek v séru pacientů s mnohočetným myelomem v remisi
Main topic in English
Implementation of Aanalytical Methods For Detection and Quantification of Specific Anti-Enol IgG In Serum of Patients With Multiple Myeloma In Remission
Title according to student
Zavedení metody pro průkaz a kvantifikaci specifických anti-ENO1 protilátek v séru pacientů s mnohočetným myelomem v remisi
English title as given by the student
Implementation of Analytical Methods for Detection and Quantification of Specific Anti-ENO1 IgG in Serum of Patients with Multiple Myeloma in Remission
Práce se zabývá vývojem metod, kterými by se daly prokázat a kvantifikovat specifické anti-ENO1 protilátky v séru pacientů s mnohočetným myelomem v remisi. V teoretické části práce je nejprve popsáno onemocnění mnohočetný myelom s důrazem na jeho diagnostiku. Dále je podrobněji popsána role enolázy v průběhu nádorového bujení a jakým způsobem se uplatňuje funkce imunitního systému v boji proti nádorům. V závěru teoretické části je přehled a základní charakteristika metod, pomocí nichž lze prokazovat a kvantifikovat specifické protilátky. Mezi tyto metody patří mj. ELISA a Dot blot. V experimentální části jsou tyto tři základní metody použity pro průkaz a kvantifikaci specifických anti-ENO1 protilátek v séru pacientů s mnohočetným myelomem v období remise. Součástí experimentu bylo i zavedení metody pro stanovení aktivity rekombinantní formy enzymu ENO1. Vzhledem k omezené reaktivitě specifických protilátek s rekombinantní formou enolázy ENO1 byla zařazena i metoda SERPA pomocí níž bylo možné monitorovat reaktivitu přirozených pacientských protilátek s nativní formou enzymu ENO1.
Annotation in English
This thesis deals with the development of methods that could be used to detection and quantification specific anti-ENO1 antibody in the serum of patients with multiple myeloma in remission. The theoretical part of this thesis describes the disease multiple myeloma with emphasis on its diagnosis. Then it is described in more detail the role of enolase during tumor growth and the function of the immune system works in the fight against tumors. The conclusion of the theoretical part is an overview and basic characteristics of methods that can be used to detection and quantification specific antibodies. These methods are ELISA and Dot blot. In the experimental part, these three basic methods are used for the detection and quantification of specific anti-ENO1 antibodies in the serum of patients with multiple myeloma in remission. Part of the experiment was the introduction of a method for determining the activity of the recombinant form of enzyme ENO1. Due to limited reactivity of specific antibodies with the recombinant form of enolase ENO1, it was included the SERPA method, which made it possible to monitor the reactivity of natural patient antibodies with the native form of the enzyme ENO1.
Práce se zabývá vývojem metod, kterými by se daly prokázat a kvantifikovat specifické anti-ENO1 protilátky v séru pacientů s mnohočetným myelomem v remisi. V teoretické části práce je nejprve popsáno onemocnění mnohočetný myelom s důrazem na jeho diagnostiku. Dále je podrobněji popsána role enolázy v průběhu nádorového bujení a jakým způsobem se uplatňuje funkce imunitního systému v boji proti nádorům. V závěru teoretické části je přehled a základní charakteristika metod, pomocí nichž lze prokazovat a kvantifikovat specifické protilátky. Mezi tyto metody patří mj. ELISA a Dot blot. V experimentální části jsou tyto tři základní metody použity pro průkaz a kvantifikaci specifických anti-ENO1 protilátek v séru pacientů s mnohočetným myelomem v období remise. Součástí experimentu bylo i zavedení metody pro stanovení aktivity rekombinantní formy enzymu ENO1. Vzhledem k omezené reaktivitě specifických protilátek s rekombinantní formou enolázy ENO1 byla zařazena i metoda SERPA pomocí níž bylo možné monitorovat reaktivitu přirozených pacientských protilátek s nativní formou enzymu ENO1.
Annotation in English
This thesis deals with the development of methods that could be used to detection and quantification specific anti-ENO1 antibody in the serum of patients with multiple myeloma in remission. The theoretical part of this thesis describes the disease multiple myeloma with emphasis on its diagnosis. Then it is described in more detail the role of enolase during tumor growth and the function of the immune system works in the fight against tumors. The conclusion of the theoretical part is an overview and basic characteristics of methods that can be used to detection and quantification specific antibodies. These methods are ELISA and Dot blot. In the experimental part, these three basic methods are used for the detection and quantification of specific anti-ENO1 antibodies in the serum of patients with multiple myeloma in remission. Part of the experiment was the introduction of a method for determining the activity of the recombinant form of enzyme ENO1. Due to limited reactivity of specific antibodies with the recombinant form of enolase ENO1, it was included the SERPA method, which made it possible to monitor the reactivity of natural patient antibodies with the native form of the enzyme ENO1.
Teoretická část:
1) Stručný popis onemocnění mnohočetný myelom - patogeneze onemocnění, symptomy, laboratorní diagnostika, terapie, metody používané k monitorování průběhu onemocnění a k ověřování účinnosti terapie - současný stav poznání.
2) Protinádorová imunita - popis složek IS, které se na vyhledávání nádorových buněk a na vlastní protinádorové imunitě podílejí. Větší prostor věnovat tzv. difúzním nádorům, hematoonkologickým onemocněním. Jakou roli hrají nebo mohou hrát tzv. autoprotilátky v případě difúzních nádorů, jsou nedílnou součástí protinádorové imunity? Je možné je použít k imunoterapii pacientů s tímto typem onemconění?
3) Princip metody ELISA, její využití pro průkaz a kvantifikaci specifických protilátek. Princip elektroforetické separace sérových proteinů s imunochemickou detekcí na membráně.
Experimentální část:
1) Použití elektroforetických technik a Western Blot metody pro analýzu proteinů v lidských sérech.
2) Vývoj a optimalizace metody pro analýzu imunoproteomu a průkaz specifických (auto)protilátek u pacientů s mnohočetným myelomem v remisi.
3) Optimalizace podmínek pro rutinní stanovení anti-ENOL protilátek v reálných vzorcích séra nebo plazmy odebraných pacientům s MM.
Research Plan
Teoretická část:
1) Stručný popis onemocnění mnohočetný myelom - patogeneze onemocnění, symptomy, laboratorní diagnostika, terapie, metody používané k monitorování průběhu onemocnění a k ověřování účinnosti terapie - současný stav poznání.
2) Protinádorová imunita - popis složek IS, které se na vyhledávání nádorových buněk a na vlastní protinádorové imunitě podílejí. Větší prostor věnovat tzv. difúzním nádorům, hematoonkologickým onemocněním. Jakou roli hrají nebo mohou hrát tzv. autoprotilátky v případě difúzních nádorů, jsou nedílnou součástí protinádorové imunity? Je možné je použít k imunoterapii pacientů s tímto typem onemconění?
3) Princip metody ELISA, její využití pro průkaz a kvantifikaci specifických protilátek. Princip elektroforetické separace sérových proteinů s imunochemickou detekcí na membráně.
Experimentální část:
1) Použití elektroforetických technik a Western Blot metody pro analýzu proteinů v lidských sérech.
2) Vývoj a optimalizace metody pro analýzu imunoproteomu a průkaz specifických (auto)protilátek u pacientů s mnohočetným myelomem v remisi.
3) Optimalizace podmínek pro rutinní stanovení anti-ENOL protilátek v reálných vzorcích séra nebo plazmy odebraných pacientům s MM.
Recommended resources
K textu použít relevantní internetové zdroje, průběžně sledovat novinky v oboru.
Recommended resources
K textu použít relevantní internetové zdroje, průběžně sledovat novinky v oboru.
Enclosed appendices
-
Appendices bound in thesis
illustrations, tables
Taken from the library
No
Full text of the thesis
Appendices
Reviewer's report
Supervisor's report
Defence procedure record
1. Prezentace výsledků diplomové práce.
2. Diskuze k posudkům vedoucího a oponenta diplomové práce.
3. Studentka zodpověděla všechny dotazy a připomínky k DP.