Tato práce se věnuje rekombinantním proteinům, zejména metodám jejich purifikace. V teoretické části se zabývám expresními systémy pro přípravu rekombinantních proteinů a metodami jejich purifikace. Dále popisuji vakuolární peptidázy s podrobnějším pohledem na aminopeptidázu Ape3p a zmiňuji možnosti, kterými lze stanovit jejich aktivitu. V experimentální části se věnuji optimalizaci izolace rekombinantního proteinu Ape3p kvasinky Candida albicans, zavedení postupu jeho purifikace a zavedení metody pro stanovení jeho enzymatické aktivity.
Anotace v angličtině
This thesis deals with recombinant proteins, especially with methods of their purification. The theoretical part deals with expression systems for the preparation of recombinant proteins and methods of their purification. I also describe vacuolar peptidases with a more detailed look at the aminopeptidase Ape3p and I mention the possibilities by which their activity can be determined. In the experimental part, I discuss the optimization of the isolation of the recombinant Ape3p protein of the yeast Candida albicans, the introduction of a procedure for its purification and the introduction of a method for the determination of its enzymatic activity.
Klíčová slova
Rekombinantní proteiny, metalopeptidázy, purifikace, aminopeptidáza Y
Klíčová slova v angličtině
Recombinant proteins, metallopeptidases, purification, aminopeptidase Y
Rozsah průvodní práce
87 s. (138 819 znaků)
Jazyk
CZ
Anotace
Tato práce se věnuje rekombinantním proteinům, zejména metodám jejich purifikace. V teoretické části se zabývám expresními systémy pro přípravu rekombinantních proteinů a metodami jejich purifikace. Dále popisuji vakuolární peptidázy s podrobnějším pohledem na aminopeptidázu Ape3p a zmiňuji možnosti, kterými lze stanovit jejich aktivitu. V experimentální části se věnuji optimalizaci izolace rekombinantního proteinu Ape3p kvasinky Candida albicans, zavedení postupu jeho purifikace a zavedení metody pro stanovení jeho enzymatické aktivity.
Anotace v angličtině
This thesis deals with recombinant proteins, especially with methods of their purification. The theoretical part deals with expression systems for the preparation of recombinant proteins and methods of their purification. I also describe vacuolar peptidases with a more detailed look at the aminopeptidase Ape3p and I mention the possibilities by which their activity can be determined. In the experimental part, I discuss the optimization of the isolation of the recombinant Ape3p protein of the yeast Candida albicans, the introduction of a procedure for its purification and the introduction of a method for the determination of its enzymatic activity.
Klíčová slova
Rekombinantní proteiny, metalopeptidázy, purifikace, aminopeptidáza Y
Klíčová slova v angličtině
Recombinant proteins, metallopeptidases, purification, aminopeptidase Y
Zásady pro vypracování
Teoretická část:
Rekombinantní proteiny - expresní systémy, využití.
Metody purifikace rekombinantních proteinů - stručný přehled, uvést konkrétní příklady purifikace aminopeptidáz.
Vakuolární aminopeptidázy patogenních kvasinek rodu Candida (charakterizace), zaměřit se na aminopeptidázu Ape3p (současný stav poznání).
Metody stanovení enzymové aktivity aminopeptidáz. Experimentální část:
Optimalizace přípravy vzorku rekombinantní aminopeptidázy Ape3p kvasinky C. albicans.
Výběr a zavedení postupu purifikace připravené aminopeptidázy Ape3p s His-kotvou.
Výběr a zavedení metody pro stanovení aktivity připravené aminopeptidázy Ape3p.
Zásady pro vypracování
Teoretická část:
Rekombinantní proteiny - expresní systémy, využití.
Metody purifikace rekombinantních proteinů - stručný přehled, uvést konkrétní příklady purifikace aminopeptidáz.
Vakuolární aminopeptidázy patogenních kvasinek rodu Candida (charakterizace), zaměřit se na aminopeptidázu Ape3p (současný stav poznání).
Metody stanovení enzymové aktivity aminopeptidáz. Experimentální část:
Optimalizace přípravy vzorku rekombinantní aminopeptidázy Ape3p kvasinky C. albicans.
Výběr a zavedení postupu purifikace připravené aminopeptidázy Ape3p s His-kotvou.
Výběr a zavedení metody pro stanovení aktivity připravené aminopeptidázy Ape3p.
Seznam doporučené literatury
K přípravě textu použít relevantní internetové zdroje, průběžně sledovat novinky v dané problematice.
Seznam doporučené literatury
K přípravě textu použít relevantní internetové zdroje, průběžně sledovat novinky v dané problematice.
Přílohy volně vložené
-
Přílohy vázané v práci
-
Převzato z knihovny
Ne
Plný text práce
Přílohy
Posudek(y) oponenta
Hodnocení vedoucího
Záznam průběhu obhajoby
1. Prezentace výsledků diplomové práce.
2. Diskuze k posudkům vedoucího a oponenta diplomové práce.
3. Student zodpověděl všechny dotazy a připomínky k diplomové práci.