Tato práce je zaměřena na analýzu kyselých glykosfingolipidů z plazmy s využitím
MALDI hmotnostní spektrometrie. V teoretické části jsou stručně popsány biologické funkce
studovaných lipidů v lidském organismu a obecný přehled metod k jejich analýze založených
zejména na hmotnostní spektrometrii. V praktické části jsou diskutovány jednotlivé kroky optimalizace zahrnující porovnání vhodných extrakčních protokolů a přípravy vzorku
před MALDI analýzou. Důležitou částí je validace optimalizované metody a ověření její funkčnosti pro kvantitativní analýzu. Optimalizovaná a validovaná metoda je finálně použita pro měření standardního referenčního materiálu NIST lidské plazmy SRM 1950. Výsledky jsou srovnány s dostupnými údaji v literatuře.
Anotace v angličtině
This thesis is focused on the analysis of acid glycosphingolipids from plasma using
MALDI mass spectrometry. The theoretical part briefly describes the biological functions
of the studied lipids in human organism and a general overview of methods for their analysis,
mainly mass spectrometry. In the practical part, the individual steps of optimization are discussed, including the comparison of suitable extraction protocols and sample preparation before
MALDI analysis. An important part is the validation of the optimized method and the verification of its functionality for quantitative analysis. The optimized and validated method is finally
used to measure the standard reference materiel NIST human plasma SRM 1950. The results
are compared with available data in the literature.
Lipids, plasma, extractions, mass spectrometry, MALDI
Rozsah průvodní práce
-
Jazyk
CZ
Anotace
Tato práce je zaměřena na analýzu kyselých glykosfingolipidů z plazmy s využitím
MALDI hmotnostní spektrometrie. V teoretické části jsou stručně popsány biologické funkce
studovaných lipidů v lidském organismu a obecný přehled metod k jejich analýze založených
zejména na hmotnostní spektrometrii. V praktické části jsou diskutovány jednotlivé kroky optimalizace zahrnující porovnání vhodných extrakčních protokolů a přípravy vzorku
před MALDI analýzou. Důležitou částí je validace optimalizované metody a ověření její funkčnosti pro kvantitativní analýzu. Optimalizovaná a validovaná metoda je finálně použita pro měření standardního referenčního materiálu NIST lidské plazmy SRM 1950. Výsledky jsou srovnány s dostupnými údaji v literatuře.
Anotace v angličtině
This thesis is focused on the analysis of acid glycosphingolipids from plasma using
MALDI mass spectrometry. The theoretical part briefly describes the biological functions
of the studied lipids in human organism and a general overview of methods for their analysis,
mainly mass spectrometry. In the practical part, the individual steps of optimization are discussed, including the comparison of suitable extraction protocols and sample preparation before
MALDI analysis. An important part is the validation of the optimized method and the verification of its functionality for quantitative analysis. The optimized and validated method is finally
used to measure the standard reference materiel NIST human plasma SRM 1950. The results
are compared with available data in the literature.
Lipids, plasma, extractions, mass spectrometry, MALDI
Zásady pro vypracování
1. Vypracujte literární rešerši zaměřenou na lipidy zahrnující třídy kyselých glykosfingolipidů (gangliosidy a sulfatidy), diskutujte jejich biologickou důležitost a možnosti jejich analýzy s využitím hmotnostní spektrometrie včetně správné přípravy vzorku.
2. Zoptimalizujte extrakci pro izolaci sulfatidů a gangliosidů z lidské plazmy a proveďte jejich strukturní identifikaci s využitím MALDI/Orbitrap-MS/MS a případně LC/MS/MS.
3. Ověřte funkčnost metody pro kvantitativní analýzu pomocí základních validačních parametrů, zejména ověření extrakční účinnosti, linearity, přesnosti metody a selektivity, a metodu aplikujte pro stanovení koncentrací sulfatidů a gangliosidů v lidské plazmě.
Zásady pro vypracování
1. Vypracujte literární rešerši zaměřenou na lipidy zahrnující třídy kyselých glykosfingolipidů (gangliosidy a sulfatidy), diskutujte jejich biologickou důležitost a možnosti jejich analýzy s využitím hmotnostní spektrometrie včetně správné přípravy vzorku.
2. Zoptimalizujte extrakci pro izolaci sulfatidů a gangliosidů z lidské plazmy a proveďte jejich strukturní identifikaci s využitím MALDI/Orbitrap-MS/MS a případně LC/MS/MS.
3. Ověřte funkčnost metody pro kvantitativní analýzu pomocí základních validačních parametrů, zejména ověření extrakční účinnosti, linearity, přesnosti metody a selektivity, a metodu aplikujte pro stanovení koncentrací sulfatidů a gangliosidů v lidské plazmě.
Seznam doporučené literatury
Podle pokynů vedoucího práce.
Seznam doporučené literatury
Podle pokynů vedoucího práce.
Přílohy volně vložené
-
Přílohy vázané v práci
-
Převzato z knihovny
Ne
Plný text práce
Přílohy
Posudek(y) oponenta
Hodnocení vedoucího
Záznam průběhu obhajoby
Student přednesl výsledky své diplomové práce, poté byl seznámen s posudky vedoucího a oponenta diplomové práce. Student zodpověděl dotazy oponenta a členů komise.