Úkolem této práce bylo stanovit katecholázovou aktivitu vybraných biomimetických komplexů
mědi vůči zvoleným substrátům (dopamin, 3,5-di-tert-butylkatechol). Měření byla provedena
dvěma způsoby. První z nich bylo na základě elektrochemického sledování úbytku kyslíku během oxidace substrátu katalyzované daným komplexem/tyrosinázou. Druhým způsobem bylo
spektrofotometrické snímání nárůstu absorbance vlivem vzniku produktu oxidace substrátu.
Získané kinetické parametry katalytické aktivity byly následně porovnány navzájem a také vůči
enzymu tyrosináza. Zároveň byl sledován vliv kyslíku v různém prostředí na rychlost katalytické reakce. Závěrečné experimenty byly zaměřeny na sledování katalytické aktivity vybraného komplexu zakotveného na magnetické částice. Součástí těchto experimentů byla strukturní charakterizace částic, stanovení katecholázové aktivity zakotveného komplexu a ověření
stability jeho vazby s částicemi.
Anotace v angličtině
The main aim of the thesis was determination of catecholase activity of various biomimetic
copper(II) complexes towards selected substrates (dopamine, 3,5-di-terc-butylcatechol). Two
methods were employed within the experiments. The first one deals with electrochemical monitoring of oxygen consumption during the reaction of substrate oxidation catalyzed by complex/Tyrosinase. The latter was spectrophotometric recording of absorbance during the formation of oxidation product. The obtained kinetic parameters of catalytic activity were compared also with those obtained for enzyme tyrosinase. Besides, the influence of oxygen level in
different media on catalysis was examined. Final experiments were focused on monitoring of
catalytic activity of selected copper(II) complex anchored at magnetic beads. Such experiments
included structural characterization of these beads, determination of catecholase activity with
anchored complex, and checking the stability of the covalent bond of complex with magnetic
beads.
Úkolem této práce bylo stanovit katecholázovou aktivitu vybraných biomimetických komplexů
mědi vůči zvoleným substrátům (dopamin, 3,5-di-tert-butylkatechol). Měření byla provedena
dvěma způsoby. První z nich bylo na základě elektrochemického sledování úbytku kyslíku během oxidace substrátu katalyzované daným komplexem/tyrosinázou. Druhým způsobem bylo
spektrofotometrické snímání nárůstu absorbance vlivem vzniku produktu oxidace substrátu.
Získané kinetické parametry katalytické aktivity byly následně porovnány navzájem a také vůči
enzymu tyrosináza. Zároveň byl sledován vliv kyslíku v různém prostředí na rychlost katalytické reakce. Závěrečné experimenty byly zaměřeny na sledování katalytické aktivity vybraného komplexu zakotveného na magnetické částice. Součástí těchto experimentů byla strukturní charakterizace částic, stanovení katecholázové aktivity zakotveného komplexu a ověření
stability jeho vazby s částicemi.
Anotace v angličtině
The main aim of the thesis was determination of catecholase activity of various biomimetic
copper(II) complexes towards selected substrates (dopamine, 3,5-di-terc-butylcatechol). Two
methods were employed within the experiments. The first one deals with electrochemical monitoring of oxygen consumption during the reaction of substrate oxidation catalyzed by complex/Tyrosinase. The latter was spectrophotometric recording of absorbance during the formation of oxidation product. The obtained kinetic parameters of catalytic activity were compared also with those obtained for enzyme tyrosinase. Besides, the influence of oxygen level in
different media on catalysis was examined. Final experiments were focused on monitoring of
catalytic activity of selected copper(II) complex anchored at magnetic beads. Such experiments
included structural characterization of these beads, determination of catecholase activity with
anchored complex, and checking the stability of the covalent bond of complex with magnetic
beads.
1. V teoretické části zpracujte rešerši se zaměřením na popis katalytické aktivity enzymu tyrosináza a její alternativy v podobě biomimetických komplexů mědi. Dále popište metody a přístupy jakými lze stanovit katecholázovou aktivitu enzymu i komplexů.
2. V experimentální části porovnovnejte katecholázovou aktivitu vybraných jedno- a dvoujaderných komplexů mědi vůči 3,5-di-terc-butylkatecholu a dopaminu. Pro budoucí vývoj tyrosinázových biomimetickcýh senzorů se pokuste imobilizovat vybraný komplex mědi na povrch magnetických částic a stanovit jeho katalytickou aktivitu.
3. Dosažené výsledky diskutujte a na závěr kriticky zhodnoťte.
Zásady pro vypracování
1. V teoretické části zpracujte rešerši se zaměřením na popis katalytické aktivity enzymu tyrosináza a její alternativy v podobě biomimetických komplexů mědi. Dále popište metody a přístupy jakými lze stanovit katecholázovou aktivitu enzymu i komplexů.
2. V experimentální části porovnovnejte katecholázovou aktivitu vybraných jedno- a dvoujaderných komplexů mědi vůči 3,5-di-terc-butylkatecholu a dopaminu. Pro budoucí vývoj tyrosinázových biomimetickcýh senzorů se pokuste imobilizovat vybraný komplex mědi na povrch magnetických částic a stanovit jeho katalytickou aktivitu.
3. Dosažené výsledky diskutujte a na závěr kriticky zhodnoťte.
Seznam doporučené literatury
Podle pokynů vedoucího práce.
Seznam doporučené literatury
Podle pokynů vedoucího práce.
Přílohy volně vložené
-
Přílohy vázané v práci
-
Převzato z knihovny
Ne
Plný text práce
Přílohy
Posudek(y) oponenta
Hodnocení vedoucího
Ocenění práce
Ocenění (Cena z nadačního fondu Miroslava Jurečka)
Záznam průběhu obhajoby
Studentka seznámila členy zkušební komise s obsahem své diplomové práce, poté byla seznámena s posudky vedoucího a oponenta diplomové práce. Studentka odpověděla na otázky oponenta diplomové práce a členů zkušební komise.