Diplomová práce se zaměřila na význam a funkci enzymu Enolázy a její vliv nejen při vzniku nádorových buněk, ale i v rámci boje imunitního systému proti nádorovým buňkám. V práci jsou popsány metody pro průkaz -Enolázy, stanovení její aktivity a také metody pro průkaz protilátek proti -Enoláze. V rámci experimentální části byla popsána a použita metoda sérologická imunoproteomová analýza, která byla použita k průkazu autoprotilátek anti ENO1 IgG v séru pacientů s mnohočetným myelomem. Součástí experimentální části bylo stanovení aktivity enzymu -Enoláza.
Anotace v angličtině
The diploma thesis deals with the importance and function of the enzyme -Enolase and its influence not only in the formation of tumor cells, but also in the fight of the immune system against tumor cells. The work describes methods for the detection of -Enolase, determination of its activity, as well as methods for the detection of antibodies against -Enolase. As part of the experimental part, the method of serological immunoproteome analysis was described and used to detect anti ENO1 IgG autoantibodies in the serum of patients with multiple myeloma. Part of the experimental part was the determination of the activity of the enzyme -Enolase.
Diplomová práce se zaměřila na význam a funkci enzymu Enolázy a její vliv nejen při vzniku nádorových buněk, ale i v rámci boje imunitního systému proti nádorovým buňkám. V práci jsou popsány metody pro průkaz -Enolázy, stanovení její aktivity a také metody pro průkaz protilátek proti -Enoláze. V rámci experimentální části byla popsána a použita metoda sérologická imunoproteomová analýza, která byla použita k průkazu autoprotilátek anti ENO1 IgG v séru pacientů s mnohočetným myelomem. Součástí experimentální části bylo stanovení aktivity enzymu -Enoláza.
Anotace v angličtině
The diploma thesis deals with the importance and function of the enzyme -Enolase and its influence not only in the formation of tumor cells, but also in the fight of the immune system against tumor cells. The work describes methods for the detection of -Enolase, determination of its activity, as well as methods for the detection of antibodies against -Enolase. As part of the experimental part, the method of serological immunoproteome analysis was described and used to detect anti ENO1 IgG autoantibodies in the serum of patients with multiple myeloma. Part of the experimental part was the determination of the activity of the enzyme -Enolase.
Teoretická část:
Vyhledejte a komentujte nové poznatky týkající se a) patogeneze vzniku nádorových buněk, b) role glykolytického enzymu \recke{alpha}-Enoláza při vzniku nádorových buněk a buněk s metastatickým potenciálem, c) metabolických drah, kde se \recke{alpha}-Enoláza uplatňuje a které mohou mít vztah ke vzniku buněk s maligním potenciálem.
Vyjmenujte a popište všechny dnes používané laboratorní metody a) vhodné pro průkaz \recke{alpha}-Enolázy v biologickém materiálu (buněčném lyzátu) a pro jeho strukturní analýzu, b) vhodné pro izolaci a purifikaci \recke{alpha}-Enolázy z biologického materiálu, c) vhodné pro stanovení aktivity enzymu. Uveďte a stručně popište i metody umožňující prokazovat přítomnost specifických protilátek proti Enoláze 1 v biologickém materiálu.
Zaměřte se na popis a zhodnocení vědeckých výsledků dosažených v posledních 5-10 letech.
Experimentální část:
Použití elektroforetických technik a Western Blot metody pro průkaz \recke{alpha}-Enolázy v buněčných lyzátech, tělních tekutinách, včetně optimalizace barvicích technik pro detekci proteinů přenesených na membránu.
Zavedení dvourozměrné elektroforetické techniky pro separaci buněčných proteinů s následnou imunodetekcí \recke{alpha}-Enolázy.
Příprava vzorků pro strukturní analýzu \recke{alpha}-Enolázy pomocí HPLC-ESI-MS.
Zavedení metod pro stanovení aktivity enzymu \recke{alpha}-Enoláza.
Zásady pro vypracování
Teoretická část:
Vyhledejte a komentujte nové poznatky týkající se a) patogeneze vzniku nádorových buněk, b) role glykolytického enzymu \recke{alpha}-Enoláza při vzniku nádorových buněk a buněk s metastatickým potenciálem, c) metabolických drah, kde se \recke{alpha}-Enoláza uplatňuje a které mohou mít vztah ke vzniku buněk s maligním potenciálem.
Vyjmenujte a popište všechny dnes používané laboratorní metody a) vhodné pro průkaz \recke{alpha}-Enolázy v biologickém materiálu (buněčném lyzátu) a pro jeho strukturní analýzu, b) vhodné pro izolaci a purifikaci \recke{alpha}-Enolázy z biologického materiálu, c) vhodné pro stanovení aktivity enzymu. Uveďte a stručně popište i metody umožňující prokazovat přítomnost specifických protilátek proti Enoláze 1 v biologickém materiálu.
Zaměřte se na popis a zhodnocení vědeckých výsledků dosažených v posledních 5-10 letech.
Experimentální část:
Použití elektroforetických technik a Western Blot metody pro průkaz \recke{alpha}-Enolázy v buněčných lyzátech, tělních tekutinách, včetně optimalizace barvicích technik pro detekci proteinů přenesených na membránu.
Zavedení dvourozměrné elektroforetické techniky pro separaci buněčných proteinů s následnou imunodetekcí \recke{alpha}-Enolázy.
Příprava vzorků pro strukturní analýzu \recke{alpha}-Enolázy pomocí HPLC-ESI-MS.
Zavedení metod pro stanovení aktivity enzymu \recke{alpha}-Enoláza.
Seznam doporučené literatury
-
Seznam doporučené literatury
-
Přílohy volně vložené
-
Přílohy vázané v práci
-
Převzato z knihovny
Ne
Plný text práce
Přílohy
Posudek(y) oponenta
Hodnocení vedoucího
Záznam průběhu obhajoby
1. Prezentace výsledků diplomové práce.
2. Diskuze k posudkům vedoucího a oponenta diplomové práce.
3. Student/ka zodpověděl/la všechny dotazy a připomínky k DP.