Mnohočetný myelom (MM) je druhé nejčastější hematologické nádorové onemocnění,
zpusobené abnormální proliferací jednoho nebo více klonu plazmatických buněk a jejich
akumulací v kostní dřeni. Cílem diplomové práce byla kultivace UHKT-944 buněčné linie
rezistentní na bortezomib a karfilzomib, globální proteomická analýza proteomu rezistentních
buněk s cílem odhalit proteiny, které mohou hrát v mechanismech rezistence MM dulezitou roli.
Anotace v angličtině
Multiple myeloma (MM) is the second most common hematological cancer, caused by
abnormal proliferation of one or more plasma cell clones and their accumulation in the bone
marrow. The aim of this thesis was to culture the UHKT-944 cell line resistant to bortezomib
and carfilzomib, and to perform a global proteomic analysis of the proteome of resistant cells
in order to reveal proteins that may play an important role in the resistance mechanism of MM
UHKT-944, multiple myeloma, bortezomib, carfilzomib, proteomics, mass spectrometry
Rozsah průvodní práce
61
Jazyk
CZ
Anotace
Mnohočetný myelom (MM) je druhé nejčastější hematologické nádorové onemocnění,
zpusobené abnormální proliferací jednoho nebo více klonu plazmatických buněk a jejich
akumulací v kostní dřeni. Cílem diplomové práce byla kultivace UHKT-944 buněčné linie
rezistentní na bortezomib a karfilzomib, globální proteomická analýza proteomu rezistentních
buněk s cílem odhalit proteiny, které mohou hrát v mechanismech rezistence MM dulezitou roli.
Anotace v angličtině
Multiple myeloma (MM) is the second most common hematological cancer, caused by
abnormal proliferation of one or more plasma cell clones and their accumulation in the bone
marrow. The aim of this thesis was to culture the UHKT-944 cell line resistant to bortezomib
and carfilzomib, and to perform a global proteomic analysis of the proteome of resistant cells
in order to reveal proteins that may play an important role in the resistance mechanism of MM
UHKT-944, multiple myeloma, bortezomib, carfilzomib, proteomics, mass spectrometry
Zásady pro vypracování
Teoretická část:
Mnohočetný myelom (MM) je druhé nejčastější hematopoetické onemocnění s dobou přežití od několika měsíců po desítky let (1). Tato hematologická malignita je charakterizovaná proliferací zralých plazmatických buněk a jedná se o velmi heterogenní chorobu jak na genetické bázi, tak klinickým fenotypem. I přes moderní terapeutické postupy, jakými jsou např. léčba inhibitory proteasomu, autologní transplantace kmenových buněk a imunoterapie s využitím monoklonálních a nově bispecifických protilátek, u více než třetiny pacientů není odpověď na léčbu dostatečná a dochází k rozvoji terapeutické rezistence u nádorových plazmatických buněk (2). Hmotnostní spektrometrie spojená s kapalinovou chromatografií (LC-MS) je dnes již nedílnou součástí moderní proteomiky, jinými slovy, analýzy proteinů v komplexních biologických systémech, jakými jsou buněčné populace. LC-MS je skvělým nástrojem pro výzkum mechanismů rezistence u nádorových buněčných linií MM in vitro na základě informace o proteomu těchto buněk. Hlavní cíle této diplomové práce jsou tedy následující: a) vyselektovat buněčnou linii rezistentní na dva inhibitory proteasomu (bortezomib a carfilzomib), kdy jako buněčný model bude využita linie UHKT-944 (3); b) seznámit se a využít moderní LC-MS metody pro mapování mechanismů rezistence na základě LC-MS komparativní analýzy proteomu buněk rezistentních a citlivých na daná terapeutika.
Experimentální část:
První část diplomové práce bude zaměřena na seznámení se základními postupy pro proteomickou LC-MS analýzu: a) stanovení celkové koncentrace proteinů; štěpení proteinů specifickými proteázami (lysinása C, trypsin) v bazickém prostředí; c) provedení samotné LC-MS na přístrojích Ultimate 3000 RSLCnano a Q-Exactive plus včetně vyhodnocení proteomických dat. Druhá část diplomové práce bude zaměřena na: a) kultivaci buněk UHKT-944; b) testování buněčné viability pomocí resazurinové eseje; c) selekci UHKT-944 rezistentní na bortezomib a carfilzomib; d) komparativní 2D LC-MS/MS analýzu hladiny proteinů u rezistentní buněčné linie v porovnání s kontrolou.
Zásady pro vypracování
Teoretická část:
Mnohočetný myelom (MM) je druhé nejčastější hematopoetické onemocnění s dobou přežití od několika měsíců po desítky let (1). Tato hematologická malignita je charakterizovaná proliferací zralých plazmatických buněk a jedná se o velmi heterogenní chorobu jak na genetické bázi, tak klinickým fenotypem. I přes moderní terapeutické postupy, jakými jsou např. léčba inhibitory proteasomu, autologní transplantace kmenových buněk a imunoterapie s využitím monoklonálních a nově bispecifických protilátek, u více než třetiny pacientů není odpověď na léčbu dostatečná a dochází k rozvoji terapeutické rezistence u nádorových plazmatických buněk (2). Hmotnostní spektrometrie spojená s kapalinovou chromatografií (LC-MS) je dnes již nedílnou součástí moderní proteomiky, jinými slovy, analýzy proteinů v komplexních biologických systémech, jakými jsou buněčné populace. LC-MS je skvělým nástrojem pro výzkum mechanismů rezistence u nádorových buněčných linií MM in vitro na základě informace o proteomu těchto buněk. Hlavní cíle této diplomové práce jsou tedy následující: a) vyselektovat buněčnou linii rezistentní na dva inhibitory proteasomu (bortezomib a carfilzomib), kdy jako buněčný model bude využita linie UHKT-944 (3); b) seznámit se a využít moderní LC-MS metody pro mapování mechanismů rezistence na základě LC-MS komparativní analýzy proteomu buněk rezistentních a citlivých na daná terapeutika.
Experimentální část:
První část diplomové práce bude zaměřena na seznámení se základními postupy pro proteomickou LC-MS analýzu: a) stanovení celkové koncentrace proteinů; štěpení proteinů specifickými proteázami (lysinása C, trypsin) v bazickém prostředí; c) provedení samotné LC-MS na přístrojích Ultimate 3000 RSLCnano a Q-Exactive plus včetně vyhodnocení proteomických dat. Druhá část diplomové práce bude zaměřena na: a) kultivaci buněk UHKT-944; b) testování buněčné viability pomocí resazurinové eseje; c) selekci UHKT-944 rezistentní na bortezomib a carfilzomib; d) komparativní 2D LC-MS/MS analýzu hladiny proteinů u rezistentní buněčné linie v porovnání s kontrolou.
Seznam doporučené literatury
N. W. C. J. van de Donk, C. Pawlyn, K. L. Yong, Lancet Lond. Engl. 397, 410-427 (2021)
Swan D, Murphy P, Glavey S, Quinn J. Cancers (Basel), 15(6) (2023)
Vyhlídalová I, Uherková L, Pleschnerová M,et al.: Eur J Haematol, 95, 352-60 (2015).
Seznam doporučené literatury
N. W. C. J. van de Donk, C. Pawlyn, K. L. Yong, Lancet Lond. Engl. 397, 410-427 (2021)
Swan D, Murphy P, Glavey S, Quinn J. Cancers (Basel), 15(6) (2023)
Vyhlídalová I, Uherková L, Pleschnerová M,et al.: Eur J Haematol, 95, 352-60 (2015).
Přílohy volně vložené
-
Přílohy vázané v práci
-
Převzato z knihovny
Ne
Plný text práce
Přílohy
Posudek(y) oponenta
Hodnocení vedoucího
Záznam průběhu obhajoby
1. Prezentace výsledků diplomové práce.
2. Diskuze k posudkům vedoucího a oponenta diplomové práce.
3. Studentka zodpověděla všechny dotazy a připomínky k diplomové práci.