Cílem teoretické části diplomové práce bylo popsat proteinkinázu A, metody imobilizace enzymů a elektroanalytické metody stanovení aktivity proteinkinázy A. V praktické části jsem se zabývala imobilizací proteinkinázy A na vybrané magnetické částice. Dále byla práce zaměřena na elektrochemické stanovení její enzymové aktivity pomocí nízkomolekulárního substrátu Biotin-Kemptide v přítomnosti adenosin thiotrifosfátu (ATP-S) a porovnání se solubilní formou enzymu. Dále stanovení kinetických parametrů solubilní a imobilizované proteinkinázy A. Metoda stanovení je založena na detekci zlatých nanočástic square-wave voltametrií.
Anotace v angličtině
The aim of the theoretical part of the master thesis was to describe protein kinase A, methods of enzyme immobilization and electroanalytical methods for determination of protein kinase A activity. In the practical part I focused on the immobilization of protein kinase A on selected magnetic particles. Furthermore, the work focused on the electrochemical determination of its enzyme activity using the low molecular weight substrate Biotin-Kemptide in the presence of adenosine thiotriphosphate (ATP-S) and comparison with the soluble form of the enzyme. In addition, determination of kinetic parameters of solubilized and immobilized protein kinase A. The method of determination is based on the detection of gold nanoparticles by square-wave voltammetry.
Klíčová slova
proteinkináza A, enzymová aktivita, imobilizace, magnetické částice, kinetické parametry enzymové reakce
Klíčová slova v angličtině
protein kinase A, enzyme activity, immobilization, magnetic particles, kinetic parameters of enzymatic reaction
Rozsah průvodní práce
78 s.
Jazyk
CZ
Anotace
Cílem teoretické části diplomové práce bylo popsat proteinkinázu A, metody imobilizace enzymů a elektroanalytické metody stanovení aktivity proteinkinázy A. V praktické části jsem se zabývala imobilizací proteinkinázy A na vybrané magnetické částice. Dále byla práce zaměřena na elektrochemické stanovení její enzymové aktivity pomocí nízkomolekulárního substrátu Biotin-Kemptide v přítomnosti adenosin thiotrifosfátu (ATP-S) a porovnání se solubilní formou enzymu. Dále stanovení kinetických parametrů solubilní a imobilizované proteinkinázy A. Metoda stanovení je založena na detekci zlatých nanočástic square-wave voltametrií.
Anotace v angličtině
The aim of the theoretical part of the master thesis was to describe protein kinase A, methods of enzyme immobilization and electroanalytical methods for determination of protein kinase A activity. In the practical part I focused on the immobilization of protein kinase A on selected magnetic particles. Furthermore, the work focused on the electrochemical determination of its enzyme activity using the low molecular weight substrate Biotin-Kemptide in the presence of adenosine thiotriphosphate (ATP-S) and comparison with the soluble form of the enzyme. In addition, determination of kinetic parameters of solubilized and immobilized protein kinase A. The method of determination is based on the detection of gold nanoparticles by square-wave voltammetry.
Klíčová slova
proteinkináza A, enzymová aktivita, imobilizace, magnetické částice, kinetické parametry enzymové reakce
Klíčová slova v angličtině
protein kinase A, enzyme activity, immobilization, magnetic particles, kinetic parameters of enzymatic reaction
Zásady pro vypracování
Teoretická část:
Proteinkináza A - struktura, funkce, katalytická aktivita
Metody imobilizace enzymů na magnetické částice se zaměřením na proteinkinázy - orientovaná a neorientovaná vazba
Příklady aplikací imobilizované proteinkinázy A
Stanovení aktivity imobilizované proteinkinázy A a stanovení kinetických parametrů katalyzované reakce pomocí elektroanalytických metod Experimentální část:
Seznámení se s detekcí elektroaktivních nanočástic koloidního zlata metodou square-wave voltametrie s využitím tištěných tříelektrodových senzorů s uhlíkovou pracovní elektrodou (SPCE) a borem dopovanou diamantovou elektrodou (SPBDDE).
Optimalizace podmínek elektrochemické detekce zlatých nanočástic s využitím SPBDDE
Imobilizace proteinkinázy A (PKA) na magnetické částice, stanovení aktivity PKA s peptidovým substrátem biotin-Kemptide v přítomnosti adenosin thiotrifosfátu (ATP-S).
Stanovení kinetických parametrů imobilizované PKA
Zásady pro vypracování
Teoretická část:
Proteinkináza A - struktura, funkce, katalytická aktivita
Metody imobilizace enzymů na magnetické částice se zaměřením na proteinkinázy - orientovaná a neorientovaná vazba
Příklady aplikací imobilizované proteinkinázy A
Stanovení aktivity imobilizované proteinkinázy A a stanovení kinetických parametrů katalyzované reakce pomocí elektroanalytických metod Experimentální část:
Seznámení se s detekcí elektroaktivních nanočástic koloidního zlata metodou square-wave voltametrie s využitím tištěných tříelektrodových senzorů s uhlíkovou pracovní elektrodou (SPCE) a borem dopovanou diamantovou elektrodou (SPBDDE).
Optimalizace podmínek elektrochemické detekce zlatých nanočástic s využitím SPBDDE
Imobilizace proteinkinázy A (PKA) na magnetické částice, stanovení aktivity PKA s peptidovým substrátem biotin-Kemptide v přítomnosti adenosin thiotrifosfátu (ATP-S).
Stanovení kinetických parametrů imobilizované PKA
Seznam doporučené literatury
Recentní literatura dostupná v databázích Web of Science, NCBI, PubMed, Google Scholar, atd. Další dle pokynů vedoucí práce.
Seznam doporučené literatury
Recentní literatura dostupná v databázích Web of Science, NCBI, PubMed, Google Scholar, atd. Další dle pokynů vedoucí práce.
Přílohy volně vložené
-
Přílohy vázané v práci
ilustrace, grafy, schémata, tabulky
Převzato z knihovny
Ne
Plný text práce
Přílohy
Posudek(y) oponenta
Hodnocení vedoucího
Záznam průběhu obhajoby
1. Prezentace výsledků diplomové práce.
2. Diskuze k posudkům vedoucího a oponenta diplomové práce.
3. Studentka zodpověděla všechny dotazy a připomínky k diplomové práci.