Diplomová práce se zabývá imobilizací rekombinantní hyaluron lyázy (SpHyl) na vybrané magnetické částice. Cílem práce je vyhodnotit účinnost imobilizace, stanovit operační stabilitu a aktivitu enzymů imobilizovaných na těchto částicích. Práce se zaměřuje na přípravu nosiče pro předseparační HPLC kolonu. Teoretická část práce popisuje strukturu, vlastnosti a významu kyseliny hyaluronové. Dále enzymy štěpící kyselinu hyaluronovou a možnosti jejich imobilizace na magnetické částice. Experimentální část zahrnuje proces imobilizace SpHyl na vybrané částice, ověření její účinnosti pomocí gelové elektroforézy a následné spektrofotometrické stanovení operační stability a aktivity solubilního a imobilizovaného enzymu, stejně jako stanovení kinetických parametrů pro charakterizaci připravených nosičů. Výsledky poskytují poznatky o vhodnosti použitých částic pro předseparační kolonu připravenou pro firmu Contipro a.s., kde budou v nejbližší době prováděny aplikační experimenty.
Anotace v angličtině
The thesis deals with the immobilization of recombinant hyaluronidase (SpHyl) on selected magnetic particles. The aim of the thesis is to evaluate the efficiency of immobilization, determine the operational stability, and activity of enzymes immobilized on these particles. The work focuses on the preparation of a carrier for a preseparation HPLC column. The theoretical part of the thesis describes the structure, properties, and significance of hyaluronic acid. Furthermore, it discusses enzymes cleaving hyaluronic acid and the possibilities of their immobilization on magnetic particles. The experimental part includes the process of immobilizing SpHyl on selected particles, verifying its efficiency using gel electrophoresis, and subsequent spectrophotometric determination of operational stability and activity of soluble and immobilized enzymes, as well as determination of kinetic parameters for the characterization of prepared carriers. The results provide insights into the suitability of the particles used for the preseparation column prepared for the company Contipro a.s., where application experiments will be conducted in the near future.
hyaluronic acid, hyaluronan-lyase, SpHyl, magnetic particles, immobilization
Rozsah průvodní práce
-
Jazyk
CZ
Anotace
Diplomová práce se zabývá imobilizací rekombinantní hyaluron lyázy (SpHyl) na vybrané magnetické částice. Cílem práce je vyhodnotit účinnost imobilizace, stanovit operační stabilitu a aktivitu enzymů imobilizovaných na těchto částicích. Práce se zaměřuje na přípravu nosiče pro předseparační HPLC kolonu. Teoretická část práce popisuje strukturu, vlastnosti a významu kyseliny hyaluronové. Dále enzymy štěpící kyselinu hyaluronovou a možnosti jejich imobilizace na magnetické částice. Experimentální část zahrnuje proces imobilizace SpHyl na vybrané částice, ověření její účinnosti pomocí gelové elektroforézy a následné spektrofotometrické stanovení operační stability a aktivity solubilního a imobilizovaného enzymu, stejně jako stanovení kinetických parametrů pro charakterizaci připravených nosičů. Výsledky poskytují poznatky o vhodnosti použitých částic pro předseparační kolonu připravenou pro firmu Contipro a.s., kde budou v nejbližší době prováděny aplikační experimenty.
Anotace v angličtině
The thesis deals with the immobilization of recombinant hyaluronidase (SpHyl) on selected magnetic particles. The aim of the thesis is to evaluate the efficiency of immobilization, determine the operational stability, and activity of enzymes immobilized on these particles. The work focuses on the preparation of a carrier for a preseparation HPLC column. The theoretical part of the thesis describes the structure, properties, and significance of hyaluronic acid. Furthermore, it discusses enzymes cleaving hyaluronic acid and the possibilities of their immobilization on magnetic particles. The experimental part includes the process of immobilizing SpHyl on selected particles, verifying its efficiency using gel electrophoresis, and subsequent spectrophotometric determination of operational stability and activity of soluble and immobilized enzymes, as well as determination of kinetic parameters for the characterization of prepared carriers. The results provide insights into the suitability of the particles used for the preseparation column prepared for the company Contipro a.s., where application experiments will be conducted in the near future.
hyaluronic acid, hyaluronan-lyase, SpHyl, magnetic particles, immobilization
Zásady pro vypracování
Teoretická část:
1. Enyzymy štěpící kyselinu hyaluronovou - přehled, struktura, rozdělení dle mechanismu štěpení
2. Rekombinantní hyaluronan lyázy - struktura, mechanismus, využití
3. Metody imobilizace enzymů na magnetické částice - orientovaná a neorientovaná vazba
4. Metody stanovení aktivity solubilních a imobilizovaných enzymů štěpících kyselinu haluronovou
Experimentální část:
1. Spektrofotometrické stanovení aktivity solubilní hyaluronan lyázy s využitím vysokomolekulární kyseliny hyaluronové
2. Imobilizace enzymu SpHyl na vybrané magnetické částice - neorientovaná a orientovaná imobilizace, optimalizace podmínek
3. Stanovení aktivity imobilizované SpHyl, ověření účinnosti štěpení - konfirmace pomocí PAGE v prostředí TBE se specifickým barvením sacharidů
4. Stanovení operační a skladovací stability
Zásady pro vypracování
Teoretická část:
1. Enyzymy štěpící kyselinu hyaluronovou - přehled, struktura, rozdělení dle mechanismu štěpení
2. Rekombinantní hyaluronan lyázy - struktura, mechanismus, využití
3. Metody imobilizace enzymů na magnetické částice - orientovaná a neorientovaná vazba
4. Metody stanovení aktivity solubilních a imobilizovaných enzymů štěpících kyselinu haluronovou
Experimentální část:
1. Spektrofotometrické stanovení aktivity solubilní hyaluronan lyázy s využitím vysokomolekulární kyseliny hyaluronové
2. Imobilizace enzymu SpHyl na vybrané magnetické částice - neorientovaná a orientovaná imobilizace, optimalizace podmínek
3. Stanovení aktivity imobilizované SpHyl, ověření účinnosti štěpení - konfirmace pomocí PAGE v prostředí TBE se specifickým barvením sacharidů
4. Stanovení operační a skladovací stability
Seznam doporučené literatury
Recentní literatura dostupná v databázích Web of Science, NCBI, PubMed, Google Scholar, atd. Další dle pokynů vedoucí práce.
Seznam doporučené literatury
Recentní literatura dostupná v databázích Web of Science, NCBI, PubMed, Google Scholar, atd. Další dle pokynů vedoucí práce.
Přílohy volně vložené
-
Přílohy vázané v práci
-
Převzato z knihovny
Ne
Plný text práce
Přílohy
Odůvodnění nezveřejnění VŠKP
Posudek(y) oponenta
Hodnocení vedoucího
Záznam průběhu obhajoby
Studentka seznámila členy zkušební komise s obsahem své diplomové práce, poté byla seznámena s posudky vedoucího a oponenta diplomové práce. Studentka odpověděla na otázky oponenta diplomové práce a členů zkušební komise.