Diplomová práce se zabývá imobilizací proteinkinázy na magnetický nosič, fosforylací proteinů na tyrosinu a její detekcí. Fosforylace byla provedena u dvou proteinů - alfa-synukleinu a myelinovém bazickém proteinu pomocí volné i imobilizované Src kinázy. Detekce byla provedena metodami Western blotu pomocí dendrimeru pIMAGO a specifických protilátek proti fosforylovanému tyrosinu a hmotnostní spektrometrie. Stabilita imobilizované Src kinázy byla sledována pomocí Src peptidu s analýzou hmotnostní spektrometrií.
Anotace v angličtině
The thesis deals with the immobilization of protein kinase on a magnetic carrier, the phosphorylation of proteins on tyrosine and its detection. Phosphorylation was performed on two proteins - alpha-synuclein and myelin basic protein using both soluble and immobilized Src kinase. Detection was performed by Western blot methods using pIMAGO dendrimer and specific antibodies against phosphorylated tyrosine and mass spectrometry. The stability of immobilized Src kinase was monitored using Src peptide and mass spectrometry analysis.
Klíčová slova
Fosforylace, fosfoproteiny, Src kináza, imobilizace enzymu, alfa-synuklein, myelinový bazický protein, tau protein
Klíčová slova v angličtině
Phosphorylation, phosphoproteins, Src kinase, enzyme immobilization, alpha-synuclein, myelin basic protein, tau protein
Rozsah průvodní práce
103 s. (187 884 znaků)
Jazyk
CZ
Anotace
Diplomová práce se zabývá imobilizací proteinkinázy na magnetický nosič, fosforylací proteinů na tyrosinu a její detekcí. Fosforylace byla provedena u dvou proteinů - alfa-synukleinu a myelinovém bazickém proteinu pomocí volné i imobilizované Src kinázy. Detekce byla provedena metodami Western blotu pomocí dendrimeru pIMAGO a specifických protilátek proti fosforylovanému tyrosinu a hmotnostní spektrometrie. Stabilita imobilizované Src kinázy byla sledována pomocí Src peptidu s analýzou hmotnostní spektrometrií.
Anotace v angličtině
The thesis deals with the immobilization of protein kinase on a magnetic carrier, the phosphorylation of proteins on tyrosine and its detection. Phosphorylation was performed on two proteins - alpha-synuclein and myelin basic protein using both soluble and immobilized Src kinase. Detection was performed by Western blot methods using pIMAGO dendrimer and specific antibodies against phosphorylated tyrosine and mass spectrometry. The stability of immobilized Src kinase was monitored using Src peptide and mass spectrometry analysis.
Klíčová slova
Fosforylace, fosfoproteiny, Src kináza, imobilizace enzymu, alfa-synuklein, myelinový bazický protein, tau protein
Klíčová slova v angličtině
Phosphorylation, phosphoproteins, Src kinase, enzyme immobilization, alpha-synuclein, myelin basic protein, tau protein
Zásady pro vypracování
Teoretická část:
Tyrosin proteinkináza src.
Proteinkinázy a Parkinsonova choroba - jaké PTM modifikace \recke{alpha}-synucleinu mohou souviset s neurodegenerativními patologiemi - fosforylace, oxidace, nitrace, aj. Modifikace dalších proteinů - MBP, tau protein
Fosforylace proteinů in vitro a metody její detekce
Imobilizované kinázy
Experimentální část:
Zavedení a optimalizace metod pro detekci fosforylace proteinů (Western blot, pImago blot, MALDI MS)
Fosforylace peptidového substrátu, proteinů MBP a \recke{alpha}-synukleinu, volnou a imobilizovanou Src kinázou
Stabilita Src kinázy imobilizované na magnetické částice
Zásady pro vypracování
Teoretická část:
Tyrosin proteinkináza src.
Proteinkinázy a Parkinsonova choroba - jaké PTM modifikace \recke{alpha}-synucleinu mohou souviset s neurodegenerativními patologiemi - fosforylace, oxidace, nitrace, aj. Modifikace dalších proteinů - MBP, tau protein
Fosforylace proteinů in vitro a metody její detekce
Imobilizované kinázy
Experimentální část:
Zavedení a optimalizace metod pro detekci fosforylace proteinů (Western blot, pImago blot, MALDI MS)
Fosforylace peptidového substrátu, proteinů MBP a \recke{alpha}-synukleinu, volnou a imobilizovanou Src kinázou
Stabilita Src kinázy imobilizované na magnetické částice
Seznam doporučené literatury
Recentní literatura dostupná v databázi WoS, MEDLINE, Science direct; odborné knihy. Další dle pokynů vedoucí diplomové práce.
Seznam doporučené literatury
Recentní literatura dostupná v databázi WoS, MEDLINE, Science direct; odborné knihy. Další dle pokynů vedoucí diplomové práce.
Přílohy volně vložené
-
Přílohy vázané v práci
ilustrace, grafy, tabulky
Převzato z knihovny
Ne
Plný text práce
Přílohy
Posudek(y) oponenta
Hodnocení vedoucího
Záznam průběhu obhajoby
1. Prezentace výsledků diplomové práce.
2. Diskuze k posudkům vedoucího a oponenta diplomové práce.
3. Studentka zodpověděla všechny dotazy a připomínky k diplomové práci.