Diplomová práce se zaměřuje na studium vztahu mezi Toll-like receptory (TLR) a gramnegativními infekcemi reprezentovanými střevním patogenem Salmonella Typhimurium za využití modelu gnotobiotického selete. TLR jsou klíčové receptory imunitního systému, kterými rozpoznává organismus hostitele cizí i vlastní nebezpečné molekulární struktury, což vede k aktivaci nespecifické imunitní odpovědi. Na základě použitých metod real-time PCR, ELISA a xMAP technologie popisujeme expresi mRNA Toll-like receptorů (TLR) 2, 4 a 9 a s nimi spjatých molekul - koreceptorů MD-2 a CD14, adaptorových proteinů MyD88 a TRIF a lipopolysacharid-binding proteinu (LBP) v ileu a kolonu. Aktivace TLR signálních drah je hodnocena hladinami zánětlivých cytokinů interleukinů (IL)-6, IL-12/23p40 a jaderného proteinu high mobility group box 1 (HMGB1). Výsledky těchto experimentů byly publikovány ve dvou impaktovaných vědeckých časopisech. Součástí práce bylo také snaha o zavedení detekce proteinů těsných spojů claudin-1 a okludin metodou ELISA.
Anotace v angličtině
The diploma thesis focuses on studying the relationship between Toll-like receptors (TLR) and gram-negative infections represented by the intestinal pathogen Salmonella Typhimurium using the gnotobiotic piglet model. TLRs are key receptors of the immune system, by which the host organism recognizes both foreign and its own dangerous molecular structures, which leads to the activation of a non-specific immune response. Based on the methods of real-time PCR, ELISA, and xMAP technology, we described the mRNA expression of Toll-like receptors (TLR) 2, 4, and 9 and their associated molecules - co-receptors MD-2 and CD14, adapter proteins MyD88 and TRIF and lipopolysaccharide-binding protein (LBP) in the ileum and colon. Activation of TLR signaling pathways is assessed by the levels of inflammatory cytokines interleukin (IL)-6, IL-12/23p40, and nuclear protein high mobility group box 1 (HMGB1). The results of these experiments were published in two high-impact scientific journals. Part of the work was also an effort to introduce the detection of tight junction proteins claudin-1 and occludin by the ELISA method.
Diplomová práce se zaměřuje na studium vztahu mezi Toll-like receptory (TLR) a gramnegativními infekcemi reprezentovanými střevním patogenem Salmonella Typhimurium za využití modelu gnotobiotického selete. TLR jsou klíčové receptory imunitního systému, kterými rozpoznává organismus hostitele cizí i vlastní nebezpečné molekulární struktury, což vede k aktivaci nespecifické imunitní odpovědi. Na základě použitých metod real-time PCR, ELISA a xMAP technologie popisujeme expresi mRNA Toll-like receptorů (TLR) 2, 4 a 9 a s nimi spjatých molekul - koreceptorů MD-2 a CD14, adaptorových proteinů MyD88 a TRIF a lipopolysacharid-binding proteinu (LBP) v ileu a kolonu. Aktivace TLR signálních drah je hodnocena hladinami zánětlivých cytokinů interleukinů (IL)-6, IL-12/23p40 a jaderného proteinu high mobility group box 1 (HMGB1). Výsledky těchto experimentů byly publikovány ve dvou impaktovaných vědeckých časopisech. Součástí práce bylo také snaha o zavedení detekce proteinů těsných spojů claudin-1 a okludin metodou ELISA.
Anotace v angličtině
The diploma thesis focuses on studying the relationship between Toll-like receptors (TLR) and gram-negative infections represented by the intestinal pathogen Salmonella Typhimurium using the gnotobiotic piglet model. TLRs are key receptors of the immune system, by which the host organism recognizes both foreign and its own dangerous molecular structures, which leads to the activation of a non-specific immune response. Based on the methods of real-time PCR, ELISA, and xMAP technology, we described the mRNA expression of Toll-like receptors (TLR) 2, 4, and 9 and their associated molecules - co-receptors MD-2 and CD14, adapter proteins MyD88 and TRIF and lipopolysaccharide-binding protein (LBP) in the ileum and colon. Activation of TLR signaling pathways is assessed by the levels of inflammatory cytokines interleukin (IL)-6, IL-12/23p40, and nuclear protein high mobility group box 1 (HMGB1). The results of these experiments were published in two high-impact scientific journals. Part of the work was also an effort to introduce the detection of tight junction proteins claudin-1 and occludin by the ELISA method.
V teoretické části se studentka zaměří na popis a význam Toll-like receptoru (TLR) 4 při střevních infekcích, zejména bakterií S. Typhimurium. Popíše strukturu a fungování receptoru, jeho expresi a změny exprese u gnotobiotických zvířat v souvislosti s bakteriálním osídlením střevní sliznice.
Experimentální část:
Seznámit se se získáním a odchovem gnotobiotických zvířat, jejich osidlováním definovanou bakteriální mikrobiotou, infekcí Salmonella Typhimurium, odběrem vzorků a jejich přípravou pro jejich následné analýzy.
U vybraných vzorků provést izolací celkové RNA a syntézu cDNA, analýzu metodou ELISA.
Vyhodnotit a diskutovat získané výsledky.
Zásady pro vypracování
Teoretická část:
V teoretické části se studentka zaměří na popis a význam Toll-like receptoru (TLR) 4 při střevních infekcích, zejména bakterií S. Typhimurium. Popíše strukturu a fungování receptoru, jeho expresi a změny exprese u gnotobiotických zvířat v souvislosti s bakteriálním osídlením střevní sliznice.
Experimentální část:
Seznámit se se získáním a odchovem gnotobiotických zvířat, jejich osidlováním definovanou bakteriální mikrobiotou, infekcí Salmonella Typhimurium, odběrem vzorků a jejich přípravou pro jejich následné analýzy.
U vybraných vzorků provést izolací celkové RNA a syntézu cDNA, analýzu metodou ELISA.
Vyhodnotit a diskutovat získané výsledky.
Seznam doporučené literatury
Recentní literatura dostupná v databázích Web of Science, NCBI, PubMed, Google Scholar, atd. Další dle pokynů vedoucí práce.
Seznam doporučené literatury
Recentní literatura dostupná v databázích Web of Science, NCBI, PubMed, Google Scholar, atd. Další dle pokynů vedoucí práce.
Přílohy volně vložené
-
Přílohy vázané v práci
ilustrace, grafy, schémata, tabulky
Převzato z knihovny
Ne
Plný text práce
Přílohy
Posudek(y) oponenta
Hodnocení vedoucího
Záznam průběhu obhajoby
1. Prezentace výsledků diplomové práce.
2. Diskuze k posudkům vedoucího a oponenta diplomové práce.
3. Studentka zodpověděla všechny dotazy a připomínky k diplomové práci.